[发明专利]利用基因编辑UC-MSC改善胰岛β细胞功能的方法在审
| 申请号： | 202211021408.8 | 申请日： | 2022-08-24 |
| 公开（公告）号： | CN116064370A | 公开（公告）日： | 2023-05-05 |
| 发明（设计）人： | 刘俊;王旭;林文龙;桂智 | 申请（专利权）人： | 深圳市沃英达生命科学有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071;C12N5/0775;C12N5/10;C07K14/48;C07K14/62;C12N15/113;C12P21/02 |
| 代理公司： | 北京睿派知识产权代理有限公司 11597 | 代理人： | 刘锋 |
| 地址： | 518126 广东省深圳市宝安区西乡*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 利用 基因 编辑 uc msc 改善 胰岛 细胞 功能 方法 | ||
1.一种促进胰岛β细胞分泌胰岛素的方法，其特征在于，所述的方法包括将胰岛β细胞与NGF基因过表达的间充质干细胞共培养。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的方法包括采用sgRNA靶向NGF基因的转录起始位点，启动转录，以激活NGF基因表达。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的sgRNA的靶位点序列包含SEQ IDNO：5、8或11中的任一种或两种以上的组合。
4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于，所述的方法包括向间充质干细胞中导入载体组合物，以激活NGF基因表达，获得NGF基因过表达的间充质干细胞；
优选的，所述的载体组合物包括：
A)表达一个或多个sgRNA和MS2结合位点的载体，或一个或多个表达sgRNA和MS2结合位点的载体；
B)表达融合蛋白MS2-P65-HSF1的载体；以及，
C)表达dCas9蛋白的载体；
优选的，所述的载体为病毒载体。
5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，所述的间充质干细胞来源于人或非人动物的脐带、骨髓、脐血或脂肪。
6.根据权利要求1-5任一所述的方法，其特征在于，其中，胰岛β细胞与NGF基因过表达的间充质干细胞以1：(3-7)的比例共培养。
7.一种构建NGF基因过表达的间充质干细胞的sgRNA，其特征在于，所述的sgRNA的靶位点序列包含SEQ ID NO：5、8或11中的任一种或两种以上的组合。
8.一种包含权利要求7所述的sgRNA的载体或载体组合物；
优选的，所述的载体组合物包括：
A)表达一个或多个sgRNA和MS2结合位点的载体，或一个或多个表达sgRNA和MS2结合位点的载体；
B)表达融合蛋白MS2-P65-HSF1的载体；以及，
C)表达dCas9蛋白的载体；
优选的，所述的载体为病毒载体。
9.一种NGF基因过表达的间充质干细胞的制备方法，其特征在于，包括采用权利要求7所述的sgRNA靶向NGF基因的转录起始位点，启动转录，以激活NGF基因表达；
优选的，包括向间充质干细胞中导入权利要求8所述的载体组合物，以激活NGF基因表达，获得NGF基因过表达的间充质干细胞。
10.一种抑制胰岛β细胞凋亡、延长胰岛β细胞存活时间或提高胰岛β细胞存活率的方法，其特征在于，所述的方法包括将胰岛β细胞与NGF基因过表达的间充质干细胞共培养。
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