[发明专利]CRISPRa和化学诱导联合制备胰岛素分泌细胞的方法

权利要求书

1.一种诱导间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞的方法，其特征在于，所述的方法包括导入载体组合物，以激活NeuroD1基因表达，诱导获得胰岛素分泌细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的载体组合物包含：

A)表达一个或多个sgRNA和MS2结合位点的载体，或一个或多个表达sgRNA和MS2结合位点的载体；

B)表达融合蛋白MS2-P65-HSF1的载体；以及，

C)表达dCas9蛋白的载体；

优选的，所述的载体为病毒载体。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的sgRNA的靶位点序列包含SEQ IDNO：25、26、27或28中的任一种或两种以上的组合。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，编码sgRNA的双链DNA序列选自下列任一组或两种以上的组合：

A)SEQ ID NO：1、2；

B)SEQ ID NO：3、4；

C)SEQ ID NO：5、6；

D)SEQ ID NO：7、8。

5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，所述的间充质干细胞来源于人或非人动物的脐带、骨髓、脐血或脂肪。

6.根据权利要求1-5任一所述的方法，其特征在于，所述的方法还包括培养导入载体组合物的间充质干细胞，所述培养使用的培养基中加入胎牛血清、表皮生长因子、B27、烟酰胺、betacalulin、胰高糖素样肽-1或β-巯基乙醇中的一种或两种以上的组合；优选的，所述的培养基为DMEM培养基。

7.根据权利要求1-6任一所述的方法，其特征在于，所述的方法包括将载体组合物转染至间充质干细胞中，用包含胎牛血清的DMEM培养基培养2-5天，更换包含胎牛血清、表皮生长因子和B27的DMEM培养基培养2-5天，再更换包含烟酰胺、B27、betacalulin、胰高糖素样肽-1和β-巯基乙醇的DMEM培养基培养2-5天，之后每2-5天更换一次包含烟酰胺、B27、betacalulin、胰高糖素样肽-1和β-巯基乙醇的DMEM培养基。

8.一种载体组合物，其特征在于，所述的载体组合物包含：

A)表达一个或多个sgRNA和MS2结合位点的载体，或一个或多个表达sgRNA和MS2结合位点的载体；

B)表达融合蛋白MS2-P65-HSF1的载体；以及，

C)表达dCas9蛋白的载体；

优选的，所述的载体为病毒载体；

所述的sgRNA的靶位点序列包含SEQ ID NO：25、26、27或28中的任一种或两种以上的组合。

9.一种sgRNA，其特征在于，所述的sgRNA的靶位点序列包含SEQ ID NO：25、26、27或28中的任一种或两种以上的组合。

10.一种药物，其特征在于，所述的药物包括权利要求1-7任一所述的方法诱导获得的胰岛素分泌细胞、权利要求8所述的载体组合物、权利要求9所述的sgRNA，以及药学上可接受的辅料。