[发明专利]一种从诱导多能干细胞诱导胸段脊髓神经干细胞的方法

权利要求书

1.一种将诱导多能干细胞诱导为胸段脊髓神经干细胞的方法，包括如下步骤：对诱导多能干细胞进行诱导分化培养以形成胸段脊髓神经干细胞，具体包括：

第1天：将诱导多能干细胞置于诱导培养基1中培养；所述诱导培养基1中含有的诱导分子为Y-27632、CHIR98014、碱性成纤维生长因子和Dorsomorphin；

第2-3天：将第1天培养后的细胞转入诱导培养基2中培养；所述诱导培养基2中含有的诱导分子为CHIR98014、碱性成纤维生长因子和Dorsomorphin；

第4天：将第3天培养后的细胞转入诱导培养基3中培养；所述诱导培养基3中含有的诱导分子为Y-27632、SB431542、Dorsomorphin和嘌吗啡胺；

第5-10天：将第4天培养后的细胞转入诱导培养基4中培养；所述诱导培养基4中含有的诱导分子为SB431542、Dorsomorphin和嘌吗啡胺；

在所述诱导培养基1中，Y-27632的终浓度为10μM、CHIR98014的终浓度为0.5-7μM、碱性成纤维生长因子的终浓度为2-200ng/mL、Dorsomorphin的终浓度为0.2-20μM；

在所述诱导培养基2中，CHIR98014的终浓度为0.5-7μM、碱性成纤维生长因子的终浓度为2-200ng/mL、Dorsomorphin的终浓度为0.2-20μM；

在所述诱导培养基3中，Y-27632的终浓度为10μM、SB431542的终浓度为2-20μM、Dorsomorphin的终浓度为0.2-20μM、嘌吗啡胺的终浓度为0.5-10μM；

在所述诱导培养基4中，SB431542的终浓度为2-20μM、Dorsomorphin的终浓度为0.2-20μM、嘌吗啡胺的终浓度为0.5-10μM。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述诱导培养基1为向KOSR培养基中加入Y-27632、CHIR98014、碱性成纤维生长因子和Dorsomorphin后得到；

所述诱导培养基2为向KOSR培养基中加入CHIR98014、碱性成纤维生长因子和Dorsomorphin后得到；

所述诱导培养基3为向N2B27培养基中加入Y-27632、SB431542、Dorsomorphin和嘌吗啡胺后得到；

所述诱导培养基4为向N2B27培养基中加入SB431542、Dorsomorphin和嘌吗啡胺后得到。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述方法还包括：

第11天：将第10天培养后的细胞转入扩增培养基中培养；所述扩增培养基中含有生长因子，所述生长因子为碱性成纤维生长因子和表皮生长因子。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：在所述扩增培养基中，碱性成纤维生长因子的终浓度为10ng/mL、表皮生长因子的终浓度为10ng/mL。

5.一种用于将诱导多能干细胞诱导为胸段脊髓神经干细胞的成套培养基，含有权利要求1或2中所述的诱导培养基1、所述诱导培养基2、所述诱导培养基3和所述诱导培养基4。

6.根据权利要求5所述的成套培养基，其特征在于：所述成套培养基中还含有权利要求3或4中所述的扩增培养基。

7.权利要求5或6所述成套培养基在将诱导多能干细胞诱导为胸段脊髓神经干细胞中的应用。