[发明专利]一种猪蛔虫致哮喘小鼠模型及其构建方法

说明书

本发明提供了一种猪蛔虫致哮喘小鼠模型及其构建方法，包括：1)将小鼠麻醉，手术暴露气管，在喉部下方第3节和第4节软骨间注射猪蛔虫蛋白致敏剂，倾斜手术台，使小鼠头部方向抬起，保持30s后进行缝合；2)缝合后第8天，小鼠经鼻滴注猪蛔虫蛋白激发剂，每天滴鼻一次，持续5天，滴鼻完成后，观察小鼠呼吸状态。本发明使用了商品化的猪蛔虫蛋白作为抗原，避免了蛔虫或蛔虫卵所造成环境污染或对实验人员造成伤害的风险；使用普通Balb/c小鼠，价格较低，遗传背景明确，便于探讨哮喘气道炎症反应及气道高反应性产生的免疫遗传机制；滴鼻溶剂选择了接近中性的PBS缓冲溶液，减少了对肺部的额外影响，发病诱因更接近临床。

技术领域

本发明属于动物模型技术领域，涉及一种猪蛔虫致哮喘小鼠模型及其构建方法。

背景技术

过敏性哮喘(bronchial asthma，哮喘)是由多种细胞特别是肥大细胞、嗜酸性粒细胞和T淋巴细胞参与的慢性气道炎症，在易感者中此种炎症可引起反复发作的喘息、气促、胸闷和(或)咳嗽等症状，多在夜间和(或)凌晨发生，气道对多种刺激因子反应性增高。

过敏原与机体第一次接触后体内变应原特异性IgE，与肥大细胞膜表面FcεRI相结合，使机体处于致敏状态，当相同的过敏原再次与已处于致敏状态的机体接触时，变应原与已致敏的肥大细胞膜表面FcεRI上的IgE相结合，受体交联会触发肥大细胞脱颗粒，进而导致其他一些中间介质的释放。这就导致了过敏性哮喘前期相反应的形成。抗原特异性T细胞启动嗜酸性粒细胞向肺部移动聚集，通过活化Th2细胞产生IL-4以及ICOS-L，活化B细胞分泌更多IgE，进而导致组织损伤。

目前常见的造模用过敏原包括卵清蛋白(OVA)、屋尘螨、花粉等，通过不同的致敏途径和激发途径，可达到不同的模型效果。

发明内容

本发明的目的在于提供一种猪蛔虫致哮喘小鼠模型及其构建方法，采用猪蛔虫蛋白作为抗原成功诱导构建了小鼠过敏性哮喘模型。

为了实现本发明的目的，本发明采用以下技术方案：

本发明提供了一种猪蛔虫致哮喘小鼠模型的构建方法，包括：

1)将小鼠麻醉，手术暴露气管，在喉部下方第3节和第4节软骨间注射猪蛔虫蛋白致敏剂，倾斜手术台，使小鼠头部方向抬起，保持30s后进行缝合；

2)缝合后第8天，小鼠经鼻滴注猪蛔虫蛋白激发剂，每天滴鼻一次，持续5天，滴鼻完成后，观察小鼠呼吸状态。

优选地，所述小鼠选用SPF级Balb/c小鼠，雌雄各半，7-8周龄。

优选地，步骤1)还包括将小鼠适应性饲养7天之后，进行小鼠麻醉。

优选地，所述猪蛔虫蛋白致敏剂的质量体积浓度为40μg/ml。

更优选地，步骤1)中用胰岛素注射器注射25μl猪蛔虫蛋白致敏剂。

更优选地，所述猪蛔虫蛋白致敏剂通过以下方法配制：称取5mg/ml猪蛔虫蛋白溶液10μl与1.24ml PBS配制成40μg/ml致敏剂，共1.25ml。

优选地，步骤1)中，倾斜手术台25-35°。

优选地，所述猪蛔虫蛋白激发剂的质量体积浓度为0.25mg/ml。

更优选地，步骤2)中小鼠经鼻滴注猪蛔虫蛋白激发剂50μL/只。

更优选地，所述猪蛔虫蛋白激发剂通过以下方法配制：称取10mg/ml猪蛔虫蛋白溶液100μl与3.9ml PBS配制成0.25mg/ml的激发剂，共4ml。