[发明专利]一种磁珠法纯化复性包涵体蛋白的方法

说明书

本发明提供了一种磁珠法纯化复性包涵体蛋白的方法，具体包括：对样品蛋白的预处理：将包涵体蛋白置于变性液中变性溶解，离心，取上清液，获得处理好的样品蛋白；GSH偶联磁珠纯化复性样品蛋白：将GSH偶联磁珠置于离心管中，用第一缓冲液进行清洗；将清洗后的GSH偶联磁珠与样品蛋白混合，加入还原稀释液，磁吸附，弃去上清液；用还原稀释液清洗GSH偶联磁珠，磁吸附，弃去上清液；加入第二缓冲液，磁吸附，取出上清液，获得纯化复性后的样品蛋白。本发明的优点在于，采用本发明提供的磁珠法纯化复性包涵体蛋白的方法，能够提高纯化复性的效率，避免常规复性方法的复性时间较长、溶液消耗量大的问题。

技术领域

本发明涉及生物科研技术领域，具体涉及一种磁珠法纯化复性包涵体蛋白的方法。

背景技术

包涵体是外源基因在原核细胞中表达时，尤其是在大肠杆菌中表达时，形成的由膜包裹的高密度且不溶性的蛋白质颗粒。包涵体的形成较为复杂，且其形成与胞质内蛋白质生成的速率有关：新生成的多肽浓度较高且无充足的时间进行折叠，从而形成非结晶且无定形的蛋白质聚集体。在生物科研技术领域中，部分重组蛋白在形成的过程中极易形成包涵体。因此，对包涵体蛋白进行纯化复性极为重要。

常用的纯化复性包涵体蛋白的方法为：将不溶性蛋白进行变性处理，使其成为可溶性蛋白，再利用金属亲和层析或者离子交换层析的方法将其进行纯化，纯化后再通过去除变性剂使其恢复正确的蛋白构象。但是，采用此种方法进行纯化和复性需要消耗大量的化学试剂以及需要使用众多的实验仪器，纯化复性的时间较长，且在有效的工作时间内，纯化复性的样品蛋白量有限。除此之外，还包括稀释复性法、凝胶过滤层析复性法以及离子交换层析复性法。但是，稀释复性法所需复性时间长，且变性剂稀释速度太快不易控制；凝胶过滤层析复性法对样品蛋白的体积有限制，且容错率低；而离子交换层析复性法则需要避免使用与离子交换相反电荷的物质。

综上所述，急需一种能够快捷有效地将包涵体蛋白进行纯化复性的方法，以解决现有技术中存在的问题。

发明内容

本发明目的在于提供一种磁珠法纯化复性包涵体蛋白的方法，能够有效避免纯化复性时间长以及试剂消耗量大的问题，具体技术方案如下：

一种磁珠法纯化复性包涵体蛋白的方法，具体包括如下步骤：

步骤S1.1：对样品蛋白的预处理，具体是：将包涵体蛋白置于变性液中变性溶解，离心，取上清液，获得处理好的样品蛋白；其中，在变性液中，包涵体蛋白的浓度为0.4mg/mL-0.8mg/mL；

步骤S1.2：GSH偶联磁珠纯化复性样品蛋白，具体是：将GSH偶联磁珠置于离心管中，用第一缓冲液进行清洗；将清洗后的GSH偶联磁珠与步骤S1.1中获得的样品蛋白混合，加入还原稀释液进行反应，磁吸附，弃去上清液；用还原稀释液清洗GSH偶联磁珠，磁吸附，弃去上清液；在装有GSH偶联磁珠的离心管中加入第二缓冲液进行反应，磁吸附，取出上清液，获得纯化复性后的样品蛋白。

优选的，所述GSH偶联磁珠的制备方法具体包括如下步骤：

步骤S2.1：对羧基磁珠的预处理，具体是：取羧基磁珠于离心管中进行涡旋处理，磁吸附，弃去上清液；用第三缓冲液清洗涡旋处理后的羧基磁珠，磁吸附，弃去上清液；

配置EDC溶液和NHS溶液，具体是：用第三缓冲液配置EDC溶液和NHS溶液，其中：在EDC溶液中，EDC的浓度为25mg/mL；在NHS溶液中，NHS的浓度为25mg/mL；

步骤S2.2：羧基活化，具体是：将配置好的EDC溶液和NHS溶液加入装有羧基磁珠的离心管中进行涡旋处理，涡旋处理后振荡进行羧基活化；用第三缓冲液清洗羧基活化后的羧基磁珠，弃去上清液；其中，所述羧基磁珠上的羧基、EDC溶液中的EDC以及NHS溶液中的NHS之间的摩尔比为1：1：1；

步骤S2.3：GSH连接，具体是：在第四缓冲液中对清洗后的羧基活化的羧基磁珠偶联；偶联结束后磁吸附，弃去上清液；