[发明专利]一种利用血浆miRNA检测心房颤动复发的方法在审
| 申请号： | 202211057932.0 | 申请日： | 2022-08-31 |
| 公开（公告）号： | CN115341025A | 公开（公告）日： | 2022-11-15 |
| 发明（设计）人： | 侯应龙;张玉娇;陈琳琳;高梅;任满意;张勇;李展 | 申请（专利权）人： | 山东第一医科大学第一附属医院（山东省千佛山医院） |
| 主分类号： | C12Q1/6883 | 分类号： | C12Q1/6883;C12Q1/6806;C12Q1/6851;C12N15/11 |
| 代理公司： | 安徽思沃达知识产权代理有限公司 34220 | 代理人： | 赵瑜 |
| 地址： | 250014 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 血浆 mirna 检测 心房 颤动 复发 方法 | ||
1.一种利用血浆miRNA检测心房颤动复发的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)miRNA的提取：将患者空腹状态下抽取10mL静脉血，并保存于EDTA抗凝管中，于2h内第一次离心，吸取上层液体分装于1.5mL冻存管中，再第二次离心，吸取上层液体，分装于500μL的EP管中，于－80℃的条件下冻存，然后使用QIAzol Lysis Reagent试剂提取miRNA；
(2)采用qRT-PCR法检测miRNA的表达：采用加尾法行逆转录，合成cDNA，置于冰上冷却后，于－80℃的条件下保存备用，扩增完成后在PCR专用96孔板上进行加样，加入2μL模板cDNA，采用25μL反应体系行qRT-PCR分析，记录Ct值，计算miRNA表达量；
(3)心房颤动复发判定：根据所计算获得的miRNA表达量，来预估心房颤动复发状况。
2.根据权利要求1所述的一种利用血浆miRNA检测心房颤动复发的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述的离心是在4℃、3000r/min的条件下，离心10min。
3.根据权利要求1所述的一种利用血浆miRNA检测心房颤动复发的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述的第二次离心是在4℃、16 000r/min的条件下，离心10min。
4.根据权利要求1所述的一种利用血浆miRNA检测心房颤动复发的方法，其特征在于，在步骤(2)中，采用加尾法行逆转录，合成cDNA的方法是取1μg miRNA稀释10倍，于20μL反应体系下逆转录合成cDNA。
5.根据权利要求4所述的一种利用血浆miRNA检测心房颤动复发的方法，其特征在于，所述的20μL反应体系的反应条件为37℃反应60min，85℃变性5min。
6.根据权利要求1所述的一种利用血浆miRNA检测心房颤动复发的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述的25μL反应体系的反应条件为95℃预变性10min，95℃变性15s，60℃退火30s，72℃延伸30s。
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