[发明专利]ASFV非结构蛋白优势抗原表位融合蛋白及其试剂盒与应用

说明书

本发明提供了一种ASFV非结构蛋白优势抗原表位融合蛋白及其试剂盒与应用，属于基因工程技术领域。所述ASFV非结构蛋白优势抗原表位融合蛋白氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。该融合蛋白与非洲猪瘟病毒阳性血清具有良好的免疫反应原性。利用获得的ASFV非结构蛋白优势抗原表位融合蛋白作为包被抗原，建立了检测非洲猪瘟病毒非结构蛋白抗体的ELISA检测方法；该检测试剂盒具有特异性强、敏感性高、重复性好和准确性高的特点，可以有效地检测非洲猪瘟病毒感染后产生的抗体情况，为非洲猪瘟的诊断、感染机制的研究、安全高效疫苗的研制提供重要帮助。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，尤其涉及一种ASFV非结构蛋白优势抗原表位融合蛋白及其试剂盒与应用。

背景技术

非洲猪瘟(African Swine fever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(African Swine fevervirus，ASFV)引起猪的一种高度接触性传染病，其临床症状和病理变化与经典猪瘟非常相似，有着较高的发病率和死亡率。ASFV是线状双股DNA病毒，成熟病毒粒子呈20面体对称且具有囊膜，基因组的大小在不同毒株之间存在一定的差异性，总体介于170～190kb之间，基因组含有150多个开放阅读框，约编码100多种非结构蛋白和68种结构蛋白。非结构蛋白在病毒的复制与组装、调节宿主细胞机能、逃逸宿主天然免疫等方面发挥了重要作用。但有关ASFV非结构蛋白抗体检测方法相当较少，临床应用中大多都是针对非洲猪瘟病毒结构蛋白抗体的检测，严重制约了对非洲猪瘟病毒相关致病机制的深入研究和了解。

A238L蛋白是非洲猪瘟病毒重要的非结构蛋白，在病毒的感染过程中可调节宿主细胞的相关生物学功能，为非洲猪瘟病毒创造良好的生存空间。由于该蛋白含有1kb锚蛋白重复序列，因此被认为是1kb的类似物。在不同感染细胞中，该蛋白由于受不同细胞内环境的影响，使该蛋白分子量略有差异。Silk等研究显示A238L蛋白可同时存在于细胞质和细胞核中，并在感染后10～18h在细胞核中积累，能抑制NF-kappaB的激活，协助非洲猪瘟病毒逃逸宿主的天然免疫反应。另外A238L蛋白还可抑制活化T细胞核因子相关转录因子的激活，使宿主细胞的相关免疫功能丧失，促进非洲猪瘟病毒粒子的复制和转录。A238L蛋白在巨噬细胞内可通过抑制p65乙酰化和p300的活性，抑制诱导型一氧化氮合成酶基因的转录，从而减少炎症介质一氧化氮的产生，起到抗炎作用。但在对A238L蛋白分子相关作用机制的研究过程中，大多将非洲猪瘟病毒非结构蛋白A238L全基因序列进行了原核表达和真核表达，使表达的序列中含有与宿主蛋白无相互作用的序列存在，严重影响A238L蛋白分子与靶标分子序列的相互作用，不能准确显示A238L蛋白分子中与靶标蛋白分子相互作用位点；另外含有非作用序列可能会影响目的重组蛋白的表达量或造成目的重组蛋白不进行表达等。本项目技术对非洲猪瘟病毒非结构蛋白A238L的优势抗原表位进行串联表达，剔除无相关作用序列，可充分呈现出该蛋白优势抗原表位，提高该蛋白与非洲猪瘟病毒抗体抗体的结合效率，作为包被抗原可准确检测到非洲猪瘟病毒非结构蛋白抗体，以判断非洲猪瘟病毒在猪群中的流行动态，以及非洲猪瘟病毒在猪体内的感染复制规律，将为非洲猪瘟的诊断、感染机制的研究、安全高效疫苗的研制提供重要帮助。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种非洲猪瘟病毒非结构蛋白优势抗原表位融合蛋白及其试剂盒与应用，将ASFV非结构蛋白A238L蛋白的4个优势抗原表位进行串联，获得ASFV非结构蛋白优势抗原表位融合蛋白，该融合蛋白与非洲猪瘟病毒阳性血清具有良好的免疫反应原性。该试剂盒利用ASFV非结构蛋白优势抗原表位融合蛋白作为包被抗原，在检测猪血清中是否含有ASFV抗体时，具有特异性、敏感性、重复性和准确性好的特点。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种非洲猪瘟病毒非结构蛋白优势抗原表位融合蛋白，所述非洲猪瘟病毒非结构蛋白优势抗原表位融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

本发明提供了一种编码上述非洲猪瘟病毒非结构蛋白优势抗原表位融合蛋白的核苷酸。