[发明专利]一种黑木耳多糖及其应用和制备方法

权利要求书

1.一种黑木耳多糖的制备方法，其特征在于，将黑木耳经过脱脂后，在蜗牛酶作用下初步酶解，进一步通过H₂O₂协同超声波降解提取，在复合酶的作用下深度酶解，然后经过保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和长双歧杆菌的混合发酵，得到的发酵黑木耳多糖在磷酸化试剂作用下发生磷酸化反应，进一步脱蛋白、脱色后，与锌盐螯合后，得到多糖-锌复合物，即得黑木耳多糖；所述复合酶为β-葡聚糖酶和α-葡萄糖苷酶的复配混合物，质量比为3-5:1。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.脱脂：将黑木耳干燥，粉碎后，经过超临界流体萃取技术脱脂，得到脱脂黑木耳；

S2.初步酶解：将步骤S1脱脂黑木耳加入水中，加入蜗牛酶，酶解，灭酶，浓缩，干燥，得到初步酶解产物；

S3.H₂O₂协同超声波提取：将步骤S2制得的初步酶解产物加入H₂O₂溶液中，超声波处理，加入亚硫酸氢钠，醇沉，离心，干燥，得到黑木耳粗糖提取物；

S4.深度酶解：将步骤S3制得的粗糖提取物溶于水中，加入复合酶酶解，灭酶，得到深度酶解提取液；

S5.菌种的活化：将保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和长双歧杆菌分别在高氏培养基中划线，活化培养，得到菌种种子液；

S6.发酵：将步骤S5制得的菌种种子液接种至步骤S4制得的深度酶解提取液中，发酵培养，浓缩，醇沉，离心，得到发酵黑木耳多糖；

S7.磷酸化：将步骤S6制得的发酵多糖加入水中，加入硫酸钠和磷酸化试剂，调节pH值为8.8-9.2，加热反应，透析，浓缩，得到磷酸化黑木耳多糖液；

S8.脱蛋白：将步骤S7得到的磷酸化黑木耳多糖液加入Sevage试剂中，搅拌反应，离心，重复1-3次，合并液体，减压除去溶剂，得到脱蛋白黑木耳多糖；

S9.脱色：将活性炭和步骤S8制得的脱蛋白黑木耳多糖加入水中，搅拌吸附，过滤，醇沉，离心，得到精制黑木耳多糖；

S10.螯合锌：将步骤S9制得的精制黑木耳多糖和柠檬酸三钠溶于水中，加入锌盐，调节溶液pH值为7.2-7.5，加热搅拌反应，过滤，醇沉，离心，收集固体，冷冻干燥，得到黑木耳多糖。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S1中所述超临界流体萃取技术的条件为CO₂流量为7-12L/h，萃取釜压力为12-25MPa，温度为45-60℃，提取时间为1-2h；所述脱脂黑木耳、蜗牛酶的质量比为100：3-5，所述酶解温度为40-50℃，时间为1-2h；步骤S3中所述H₂O₂溶液中H₂O₂浓度为2-5wt％；所述超声波处理的功率为1500-2000W，处理时间为30-50min；步骤S4中所述粗糖提取物和复合酶的质量比为100:5-7，所述酶解温度为40-45℃，时间为3-5h。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S5中所述活化培养的条件为微缺氧条件下，温度为40-45℃，时间为18-24h，所述菌种种子液的含菌量为10⁸-10⁹cfu/mL；步骤S6中保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和长双歧杆菌的接种量分别为3-5％、1-3％、1-2％；所述发酵培养的条件为微缺氧条件下，温度为40-45℃，时间为36-48h；所述微缺氧条件为O₂含量为5-7％，CO₂含量为5-10％，余量为氮气，此中％为体积百分比含量。