[发明专利]一种猪乙型脑炎灭活疫苗及其制备方法

说明书

本发明提供了一种猪乙型脑炎灭活疫苗及其制备方法，灭活的猪乙型脑炎灭活病毒为猪乙型脑炎病毒JEV(A6株)其保藏编号为CCTCC NO:V202268。其中一种猪乙型脑炎灭活疫苗制备方法包括以下步骤：培养VERO细胞，接种JEV(A6株)毒种，收集病毒培养液，过滤浓缩、灭活并纯化，纯化后的病毒液与ISA206VG佐剂，按照水相与油相质量比1:1充分搅拌混匀，制成猪乙型脑病毒灭活疫苗(A6株)，利用生物反应器微载体悬浮培养Vero细胞技术，有利于病毒液的大规模制备，能够显著提高生产效率，保证疫苗质量稳定、可靠。

技术领域

本发明涉及生物制药领域，具体涉及一种猪乙型脑炎灭活疫苗及其制备方法。

背景技术

猪乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE)是由黄病毒科(Flaviridae)黄病毒属(Flavi.vi.rus)乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)引起的中枢神经系统感染急性、发热性人畜共患传染病。该病在不同的地域季节性发病差异显著，在热带地区没有明显的季节性，而在温带和亚热带地区发病则有严格的季节性。猪乙型脑炎是由库蚊为传播媒介引起的一种传染病，各种日龄、品种、性别的猪在受到携带乙型脑炎病毒的蚊虫叮咬后均可能感染发病，但一般对猪的致死率不高。由于猪的饲养量大且每年因大量屠宰致使猪群更新快，新出生的猪均无免疫力且易感，经过一个乙脑流行季节后，几乎100％的幼猪均受到蚊虫叮咬而感染，从而成为新的传染源。病毒通常在蚊-猪-蚊等动物间循环，猪被认为是JEV最重要的自然增殖动物。猪还是JEV的重要贮存宿主和传染源，人的感染大多是猪群感染JEV经蚊传播而引致的，通常可形成“猪一蚊一人”的循环传播模式，人感染后(尤其是儿童)可引发严重的中枢神经系统疾病甚至是急性致死脑炎，死亡率可达25％。我国对JEV的研究大多集中在人源和蚊源株，对猪源JEV的报道较少。

目前国内养猪场主要使用的是猪乙型脑炎活疫苗(SA14-14-2株)，该疫苗是我国学者俞永新等将乙型脑炎病毒(SA-14株)强毒在原代细胞(地鼠肾细胞)长期传代筛选出的有良好免疫原性的弱毒株，该减毒活疫苗生产成本低，可诱导体液免疫和细胞免疫，免疫效果好。但是减毒活疫苗的毒力返强、基因重组等问题，仍是需要引起关注。同时需要特别注意的是，目前我国人用乙型脑炎活疫苗使用的也是乙型脑炎病毒(SA14-14-2株)，由于猪是JEV扩增传播宿主，对养猪场长期、大规模使用猪乙型脑炎活疫苗(SA14-14-2株)接种，可能会对乙型脑炎病毒流行株形成免疫压力，进而导致毒株变异，存在的生物安全风险值得思考。因此，开发新的猪用JEV疫苗，特别是安全、高效的灭活疫苗具有重要意义，不仅有利于猪传染病防控，而且对人类乙型脑炎病的防控也具有十分重要的公共卫生意义。

随着当前传代细胞和生物反应器用作疫苗生产介质技术被广泛应用，采用传代细胞(如Vero、BHK-21等)培养JEV疫苗成为研究趋势，人用传代细胞乙型脑炎灭活疫苗已商品化且被广泛推广应用。目前，采用生物反应器技术进行细胞和病毒的培养已经成为国际上病毒疫苗研发的热点，法国巴斯德研究所应用500L生物反应器已经成功地工业化生产出Vero细胞狂犬疫苗和小儿麻痹疫苗，取得了显著的经济效益和社会效益。因此，对利用生物反应器生产乙脑疫苗的工艺进行深入的研究，进而实现工业化生产具有广阔的前景和积极的意义。

在现有技术中，有一种种猪流行性乙型脑炎灭活疫苗制备方法公布号CN104208668A，该方法通过中国仓鼠肺细胞培养病毒制备疫苗，虽然利用仓鼠肺细胞系繁殖猪流行性乙型脑炎病毒，病毒适应性好，但该方法不利于病毒液的大规模制备，生产效率还有待提高。

发明内容

本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种猪乙型脑炎灭活疫苗及其制备方法，以实现利用Vero细胞扩繁JEV(A6株)，显著提高生产效率，保证疫苗质量稳定、可靠。