[发明专利]一种间充质干细胞的无血清培养基及其制备方法

说明书

本发明公开了一种间充质干细胞的无血清培养基及其制备方法，属于细胞培养技术领域。该培养基中含有ROCK信号通路的激动剂卡巴胆碱作为促因子分泌添加物使用，能够刺激细胞分泌促血管生成因子，同时使用血清替代物和基础培养基组成的产品。该无血清培养基是针对脐带间充质干细胞培养。该无血清培养基在培养后间充质干细胞维持其特征性表型，采用该培养液培养的间充质干细胞，其促血管形成相关生长因子，分泌促血管生成因子显著增加，如VEGF、HGF、bFGF，分泌量会大幅提升。

技术领域

本发明属于细胞培养技术领域，具体涉及一种间充质干细胞的无血清培养基及其制备方法。

背景技术

间充质干细胞，其来源广泛、免疫原性低，并具有多项分化、较强的免疫调节作用，可用于治疗红斑狼疮和硬皮病等自身免疫性疾病。能促进造血恢复功能，显著提高白血病和难治性贫血等疾病的治疗效果。也可以用于治疗骨和肌肉衰退性疾病，心脑血管疾病，肝病和老年痴呆等。但其发挥作用的机制目前还不明确。现在越来越多的研究认为间充质干细胞是通过旁分泌机制分泌大量的细胞因子作用于受损部位，进而促进组织修复。

如今，越来越多的研究表明间充质干细胞分泌的促血管生成因子可极大程度的帮助患者伤口创面及神经性系统的恢复。

现在大部分研究和实际应用中使用血清替代物培养间充质干细胞，以保证无动物源性成分的干扰，保证干细胞安全性。

但如今市面上缺乏能进一步促进细胞分泌促血管生成因子的培养体系，所以发明一种高效刺激间充质干细胞分泌促血管生成因子的MSC培养基尤为重要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种间充质干细胞的无血清培养基，该培养基在常规的基础培养基与血清替代品之外，添加炎性细胞因子TNF-α或IL-6，以及ROCK信号通路的激动剂卡巴胆碱，从而具有较高的刺激间充质干细胞分泌促血管生成因子的能力。

本发明通过以下技术方案实现：

一种间充质干细胞的无血清培养基，所述培养基由基础培养基、血清替代品和促因子分泌添加物组成。

作为优选地，所述基础培养基包括DMEM、DMEM/F12和α-MEM中的任意一种。

上述DMEM为dulbecco's modified eagle medium，达尔伯克(氏)改良伊格尔(氏)培养基。

DMEM/F12为dulbecco's modified eagle medium/Ham‘s F 12nutrient medium。

α-MEM为alpha minimal essential medium。

作为优选地，所述血清替代品为EliteGroTM-Adv、Ultroser G和血小板裂解物中的任意一种。

上述EliteGroTM-Adv或Ultroser G为常规市售血清替代物。

作为优选地，所述血清替代品的添加量为所述无血清培养基体积的1％-10％。

作为优选地，所述促因子分泌添加物包括炎性细胞因子和卡巴胆碱；

所述炎性细胞因子为肿瘤坏死因子α和/或白细胞介素6。

作为优选地，所述无血清培养基中肿瘤坏死因子α的含量为10～100ng/mL，所述无血清培养基中白细胞介素6的含量为1pg/mL～100pg/mL；

所述无血清培养基中卡巴胆碱的含量为0.01μmol/L～6mmol/L，优选为2.6μmol/L。

作为优选地，所述间充质干细胞为脐带间充质干细胞。