[发明专利]靶向Rdh12基因的sgRNA及食蟹猴Rdh12基因敲除的方法

权利要求书

1.一种靶向敲除Rdh12基因的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA为sgRNA3-1和sgRNA5-3，其核苷酸序列如下所示：

sgRNA3-1：5'-TGCTGCCAGTGAAATCCGAGTGG-3'；

sgRNA5-3：5'-GGTGGTTAACGTGTCCTCGGTGG-3'。

2.权利要求1所述靶向敲除Rdh12基因的sgRNA的应用，为1)至3)中任一种：

1)在Rdh12基因敲除领域中的应用；

2)在制备视网膜变性动物模型中的应用；

3)在筛选视网膜变性动物模型中的应用。

3.一种食蟹猴Rdh12基因敲除的方法，其特征在于，包含如下步骤：

体外合成权利要求1所述的靶向敲除Rdh12基因的sgRNA，与Cas9 mRNA混合后，注射入食蟹猴胚胎，得到Rdh12基因敲除的食蟹猴胚胎。

4.根据权利要求3所述的食蟹猴Rdh12基因敲除的方法，其特征在于，体外合成靶向敲除Rdh12基因的sgRNA的操作步骤为：

(1)根据权利要求1所述的靶向敲除Rdh12基因的sgRNA，设计合成引物，然后以px459载体为模板，进行PCR扩增，得到转录DNA模板；

(2)将步骤(1)制得的转录DNA模板转录，得到sgRNA。

5.根据权利要求4所述的食蟹猴Rdh12基因敲除的方法，其特征在于，所述的引物的核苷酸序列如下所示：

Rdh12 gRNA 3-1F：

5’-TAATACGACTCACTATAGTGCTGCCAGTGAAATCCGAGGTTTTAGAGCTAGAAATAGC-3’；

gRNA PCR R：5’-AGCACCGACTCGGTGCCACTT-3’；

Rdh12 gRNA 5-3F：

5’-TAATACGACTCACTATAGGGTGGTTAACGTGTCCTCGGGTTTTAGAGCTAGAAATAGC-3’；

gRNA PCR R：5’-AGCACCGACTCGGTGCCACTT-3’。