[发明专利]水稻抗病相关基因OsCPK17及其编码蛋白和应用

权利要求书

1.水稻抗病相关基因OsCPK17，其特征在于，基因OsCPK17的核苷酸序列参见SEQ IDNO.3。

2.权利要求1所述的水稻抗病相关基因OsCPK17编码的蛋白，其特征在于，所述蛋白的氨基酸序列参见SEQ ID NO.4。

3.根据权利要求1所述的水稻抗病相关基因OsCPK17在植物抗病中的应用，其特征在于，OsCPK17基因受植物免疫激发子诱导表达。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述植物免疫激发子为真菌几丁质与细菌鞭毛蛋白小肽flg22。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，利用基因OsCPK17创制OsCPK17基因沉默水稻材料或者转基因材料。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，利用amiRNA技术对OsCPK17进行基因沉默，创制OsCPK17基因沉默水稻材料。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，amiRNA技术如下：

针对OsCPK17基因的靶点设计引物，target1使用的引物为：

Primer I_target1：SEQ ID NO.9；

Primer II_target1：SEQ ID NO.10；

Primer III_target1：SEQ ID NO.11；

Primer IV _target1：SEQ ID NO.12；

以pNW55质粒为模板，用SEQ ID NO.17所示primer G-4368与Primer II_target1，PrimerI_target1与Primer IV_target1，PrimerIII_target1与primer G-4368三组引物，分别进行PCR扩增，分别得到fragment I，fragment II和fragment III三个片段；

纯化回收后以fragment I、fragment II和fragment III作为模板，primer G-4368和SEQ ID NO.18所示primer作为引物进行融合PCR扩增，从而将fragment I、fragment II和fragment III片段连接起来形成目的片段；然后将目的片段纯化回收；

之后将纯化回收的目的片段连接到pEASY载体上，将测序正确的片段连接到pUN1301载体上，获得用于OsCPK17基因沉默双元载体pUN1301-OsCPK17miR1；

将pUN1301-OsCPK17 miR1转化进入农杆菌感受态，获得重组农杆菌EHA105/pUN1301-OsCPK17 miR1，侵染水稻品种日本晴成熟胚诱导的愈伤组织，最终获得OsCPK17基因沉默水稻材料。