[发明专利]氨酰-tRNA合酶突变体及烯基酪氨酰-tRNA的制备方法

权利要求书

1.一种氨酰-tRNA合酶突变体，其特征在于，包括：

SEQ ID NO：1所示的pNFRS的氨基酸序列发生突变的蛋白，所述突变选自N160突变以及如下任意一种或多种突变：

A31突变为A31S、A31G、A31C、A31T或A31L；

L32突变为L32G、L32S、L32C、L32T、L32V、L32A或L32I；

L65突变为L65V、L65T、L65C或L65I；

A67突变为A67S；

L69突变为L69S、L69V或L69I；

S107突变为S107R、S107A或S107T；

F108突变为F108S、F108H或F108W；

Q109突变为Q109G、Q109S、Q109V或Q109N；

L110突变为L110R、L110Y、L110K、L110I或L110V；

P158突变为P158A、P158L、P158S、P158D或P158M；

L159突变为L159T、L159Q、L159E、L159V、L159D、L159I或L159A；

Y161突变为Y161M、Y161Q、Y161N、Y161S、Y161W或Y161F；

E162突变为E162V、E162M、E162L、E162T、E162I或E162D；

所述N160突变为N160S、N160G、N160E、N160F、N160D、N160A、N160I、N160M、N160H或N160V。

2.根据权利要求1所述的氨酰-tRNA合酶突变体，其特征在于，所述氨酰-tRNA合酶突变体选自以SEQ ID NO：1所示的pNFRS的氨基酸序列为基础发生如下任一种组合突变的突变体，

1)A31S+L32G+P158A+L159T+N160S+Y161M+E162V；

2)A31G+L32S+L65V+L69S+S107R+F108S+Q109G+L110R+P158L+L159Q+N160G+Y161Q+E162M；

3)A31G+L32C+P158S+L159E+N160E+Y161N+E162L；

4)A31C+L32T+P158S+L159Q+N160F+Y161S+E162T；

5)A31G+L32V+L65T+A67S+S107A+F108H+Q109S+L110Y+P158D+L159V+N160D+Y161Q+E162I；

6)A31T+L32V+L65C+L69V+S107A+F108S+Q109V+L110K+P158M+L159T+N160G+Y161W+E162T；

7)L32S+L159D+N160A+Y161S+E162T；

8)N160H+L32V+S107T+Q109N+L110I+L159I；

9)N160H+L32A；

10)N160H+L32V；

11)N160H+L32I+L65V+A67S+S107T+F108W+L110R+P158A+L159D+E162D；

12)N160H+A31L+L32A+L65I+L69I+L110V+L159A+Y161F。

3.一种DNA分子，其特征在于，所述DNA分子编码权利要求1或2所述的氨酰-tRNA合酶突变体。

4.一种重组质粒，其特征在于，所述重组质粒连接有权利要求3所述的DNA分子。

5.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞内含有权利要求3所述的DNA分子、或权利要求4所述的重组质粒。

6.根据权利要求5所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包括原核细胞；

优选地，所述原核细胞包括大肠杆菌。

7.一种烯基酪氨酰-tRNA的制备方法，其特征在于，利用权利要求1或2所述的氨酰-tRNA合酶突变体，催化烯基酪氨酸和tRNA结合，制备获得所述烯基酪氨酰-tRNA，所述烯基酪氨酸为非天然氨基酸。