[发明专利]一种用于检测HPV的引物与探针组合

说明书

本发明提供了一种用于检测HPV的引物与探针组合。本发明的通用引物与通用探针组合，通过将特异性引物与探针组合1）至12）中的正向引物增加17）同源重复序列，使得正向特异性引物变成50‑70个碱基的长引物，而17）同源重复序列的序列组成有两个部分，一是通用探针序列，二是通用引物序列，这样的引物和探针组合设计可以将1）至12）这12个高危亚型的探针从多个（12个或者2个以上的探针组）降低至1个通用探针，特异性引物也可以从12对降至更低，从而大大减小了由于引物组合和探针组合过多造成的干扰，同时也改善了探针过多造成成本过高的问题。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及一种用于检测HPV的引物与探针组合。

背景技术

人乳头瘤病毒（HPV）是一种DNA病毒，通常感染人类皮肤和粘膜细胞，主要通过性行为传播。

HPV的基因组可分为三个区域，早期区域（E区）、晚期区域（L区）和非编码区域（NCR）。E区可分为7个开放阅读框（E1~E7），主要编码参与病毒复制、转录、调控和细胞转化的蛋白。L区可分为L1区和L2区，L1区分别编码主要衣壳蛋白和次要衣壳蛋白。总共发现了200多种HPV亚型。根据这些亚型对生殖道相关肿瘤的毒性和致癌风险可将它们分为高危型和低危型。常见的低危型如HPV6、HPV11、HPV42、HPV43等，会引起良性病变，如外部生殖器疣。高危型，如HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV56、HPV58、HPV59、HPV68可以引起宫颈癌和宫颈上皮内瘤病变。

HPV检测技术包括细胞学方法、HPV DNA检测方法和HPV mRNA检测方法。细胞学检测方法，如巴氏涂片和液基细胞学检测，灵敏度低，对诊断医师的要求较高。mRNA检测方法对CIN2（宫颈上皮内瘤变2期）后宫颈病变的检测具有良好的特异性，但以mRNA作为检测靶点，对临床标本采集、保存、核酸提取等有较高的要求。

目前人乳头瘤病毒DNA检测技术根据原理可分为以下几种：杂交捕获-化学发光法、测序法、表面等离子谐振法、PCR毛细管电泳法、恒温扩增-荧光法、流式荧光杂交法、基因芯片法、PCR-反向点杂交法、荧光实时定量PCR法；上述检测由于检测流程复杂，成本高昂等原因给HPV检测的发展造成了一定的困难。因此降低HPV检测的成本，对预防女性宫颈癌的发生是具有积极作用的。

发明内容

本发明的主要目的是提出一种用于检测HPV的引物与探针组合，旨在解决现有的HPV检测技术检测流程复杂且成本高昂的技术问题。

为实现上述目的，本发明提出的用于检测HPV的引物与探针组合，包括以下引物与探针组合中的一种或多种：

1）HPV31型：

正向引物HPV31-F：寡核苷酸序列如SEQ ID NO1，

反向引物HPV31-R：寡核苷酸序列如SEQ ID NO2；

2）HPV33型：

正向引物HPV33-F：寡核苷酸序列如SEQ ID NO3，

反向引物HPV33-R：寡核苷酸序列如SEQ ID NO4；

3）HPV35型：

正向引物HPV35-F：寡核苷酸序列如SEQ ID NO5，

反向引物HPV35-R：寡核苷酸序列如SEQ ID NO6；

4）HPV39型：

正向引物HPV39-F：寡核苷酸序列如SEQ ID NO7，

反向引物HPV39-R：寡核苷酸序列如SEQ ID NO8；

5）HPV45型：

正向引物HPV45-F：寡核苷酸序列如SEQ ID NO9，

反向引物HPV45-R：寡核苷酸序列如SEQ ID NO10；

6）HPV51型：