[发明专利]一种增强红曲霉紫外诱变效果的方法

说明书

本发明提供了一种增强红曲霉紫外诱变效果的方法，属于微生物紫外诱变技术领域。所述增强红曲霉紫外诱变效果的方法为：在紫外诱变前将红曲霉孢子悬液接种至含H₂O₂的液体培养基中培养，并筛选出色价/桔霉素比值前20%的菌株作为出发菌，再进行紫外诱变。经过试验对比，本发明采用过氧化氢诱变后，可以显著提高红曲霉正突变率、突变株得率，并且提高了紫外诱变后的红曲霉制备红曲米的色价/桔霉素比值，可以有助于快速获得色价/桔霉素高比值的红曲霉菌株，本发明所采用的先过氧化氢后紫外的诱变方法无需使用昂贵的设备，实验过程相对安全，且突变效率高，因此在基层科研单位的育种工作中具有极大的应用潜力。

技术领域

本发明属于微生物紫外诱变技术领域，具体涉及一种增强红曲霉紫外诱变效果的方法。

背景技术

红曲霉自古就被广泛应用在中国各行各业的产品中，拥有悠久的被安全食用的历史，作为当前唯一被允许用于生产天然可食用色素的微生物，在我国微生物资源中占据着重要的地位。红曲米是将红曲霉接种在籼米上进行固态发酵而成的红色米曲，是一种药食两用的食用添加剂，具有活血化瘀，健脾消食、降血脂、降血压等生理功效。红曲米被广泛应用于各类食品加工中，如红曲枣酒、红曲酸奶、红曲香肠等。从红曲米中制备而来的红曲色素则更为广泛地应用于食品的加工与生产，例如加入红曲色素生产的面包相比普通生产的面包味道更加清新，红曲馒头的色泽、弹性、韧性以及黏性相比普通馒头得到了有利改善。然而，红曲霉还会产生一种真菌毒素——桔霉素，它对人体肾脏具有致畸致癌的潜在危害，因此获得高产色素低产桔霉素的红曲霉菌株越来越受到研究人员的重视。

生物体暴露于紫外线照射下会形成不同类型的DNA损伤，因此，紫外线作为一种非电离辐射诱变剂，在诱变育种中发挥重要作用。在食品加工行业，过氧化氢可用于消毒、杀菌、漂白等。然而，作为一种较为安全、无残留且对环境友好的化学试剂，目前未有报道将过氧化氢用于诱变菌种的研究。本研究发现以过氧化氢诱变得到的突变株为出发菌株进行紫外诱变，可以显著增强紫红曲霉紫外诱变的效果。

发明内容

本发明为了解决紫外诱变获得的红曲霉正突变率、突变株得率低，紫外诱变的随机性大等问题，提出了一种增强红曲霉紫外诱变效果的方法，具体增强红曲霉紫外诱变效果的方法为：在紫外诱变前将红曲霉孢子悬液接种至含H₂O₂的红曲霉液体培养基中培养，并筛选出色价/桔霉素比值前20%的菌株作为出发菌，再进行紫外诱变。

其中，所述含H₂O₂的红曲霉液体培养基中H₂O₂的终浓度为0.043~0.050%。

其中，所述培养温度为32~37℃。

其中，所述红曲霉孢子悬液的接种量为2~5%。

其中，所述红曲霉液体培养基的配方为，以质量体积比计：葡萄糖50~65g/L，蛋白胨20~25g/L，可溶性淀粉25~35g/L。

其中，所述紫外诱变是距离10~20w紫外灯20~40cm处磁力搅拌的作用下对红曲霉孢子悬液紫外照射60~300s。

其中，所述红曲霉孢子悬液浓度为（5.0 ± 0.5）×10⁶个/mL。

其中，所述H₂O₂的液体培养基中培养的时间为48~72h。

有益效果