[发明专利]一种重组人III型胶原蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及基因工程技术领域，特别是涉及一种重组人III型胶原蛋白及其制备方法和应用。所述重组人III型胶原蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明通过在宿主细胞中表达，得到所述重组人Ш型胶原蛋白，该蛋白具有良好的稳定性和功能性，用其包被的细胞具有优异的细胞粘附性，在此粘附机制上，可以为免疫应答、炎症反应、凝血、肿瘤转移以及创伤愈合等一系列重要生理和病理过程的重要分子基础。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，特别是涉及一种重组人III型胶原蛋白及其制备方法和应用。

背景技术

胶原蛋白是哺乳动物中最重要和最丰富的蛋白质之一，在人体的皮肤、结缔组织和骨骼以及其它组织中发现的结构蛋白。在人体内胶原蛋白的含量约为总蛋白质的30％。胶原蛋白是一种结构蛋白，细胞外基质的主要成分。Ш型胶原蛋白由三条肽链向右卷曲扭成三股螺旋状。一级结构分析表明，其多肽链很长的区段序列是由Gly-X-Y氨基酸序列重复而成。其中，x通常为脯氨酸，y通常为羟脯氨酸和羟赖氨酸，后两种氨基酸在其他蛋白质中很少见。

胶原蛋白的免疫原性低，具有促进组织修复、止血等功能，现已被广泛应用于食品、化妆品、生物医学材料、药品等领域。现阶段，胶原蛋白主要从动物组织中提取得到，然而来源于动物组织的材料都存在病毒感染的风险，如疯牛病等；同时，由于动物个体的差别导致胶原蛋白的批间稳定性很差，而且天然胶原蛋白对细胞的促粘作用还有待于进一步提高。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种具有细胞粘附的重组胶原蛋白，所述的细胞粘附性重组胶原蛋白能有效支持细胞粘附，为免疫应答、炎症反应、凝血、肿瘤转移以及创伤愈合等一系列重要生理和病理过程的重要分子基础。可广泛应用于食品、保健品、生物医药等领域。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明第一方面提供一种重组人III型胶原蛋白，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明第二方面提供编码所述的重组人III型胶原蛋白的基因，核苷酸序列如SEQID NO.2第28-3231位所示。

本发明第三方面提供含有所述的基因的表达载体。

本发明第四方面提供含有所述表达载体的宿主细胞。

进一步的，所述宿主细胞选自毕赤酵母、酿酒酵母、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中的任意一种。

本发明第五方面提供所述重组人III型胶原蛋白的制备方法，在培养基中培养所述的宿主细胞，诱导表达后进行蛋白纯化，获得重组人III型胶原蛋白。

进一步的，纯化方法选自盐析法、超滤法、亲和层析法和凝胶过滤层析法中的任意一种。

本发明第六方面提供所述重组人III型胶原蛋白在制备细胞粘附促进剂中的应用。

本发明第七方面提供所述重组人III型胶原蛋白在制备组织修复材料中的应用。

本发明第八方面提供所述重组人III型胶原蛋白在制备止血材料中的应用。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

1)本发明的重组人III型胶原蛋白与天然人胶原蛋白基因长度相当，保留了原有全长胶原蛋白的特性，且其翻译的蛋白分子量适中，容易制备。

2)本发明的重组人III型胶原蛋白去除了胶原编码区C-端、N-端的全长链序列，有效地避免了一系列抗原免疫反应。

3)本发明制备的重组人III型胶原蛋白由毕赤酵母工程菌表达而得，该蛋白无内毒素隐患，且该蛋白不携带组氨酸标记，可通过分子筛进行纯化，最终直接可得目的蛋白，不需要额外切除组氨酸标记序列。