[发明专利]用于检测兔头鲀属河鲀鱼成分真实性的引物探针组、试剂盒及方法

说明书

本发明属于生物检测技术领域，公开了用于检测兔头鲀属河鲀鱼成分真实性的引物探针组、试剂盒及方法，包括黑腮兔头鲀、兔头鲀、暗鳍兔头鲀、月尾兔头鲀、棕斑兔头鲀的引物和探针、试剂盒及应用。该引物组可特异、灵敏扩增兔头鲀属河鲀鱼成分，该检测方法特异性好、灵敏度高、稳健性好，可以对食品中掺杂着含量低至0.1％的兔头鲀属河鲀鱼成分加以鉴别出来，保障了经认证授权养殖可食用河鲀鱼的食品真实性。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及用于检测兔头鲀属河鲀鱼成分真实性的引物探针组、试剂盒及方法。

背景技术

河鲀(pufferfish)泛指硬骨鱼纲、鲀形目、鲀科的各属鱼类。其肉味鲜美、营养丰富，被誉为“菜肴之冠”，但其卵巢、肝脏、肾脏、眼睛、血液中含有剧毒的河豚毒素，处理不当或误食，轻者中毒，重者丧命。此外，在兔头鲀属中有若干种河鲀鱼种类的肌肉也含有河豚毒素，有的甚至有剧毒，不管是被加工制造成鱼干或直接烹食，中毒事件时有所闻。快速增长的高档水产品趋势导致需求增加，助长了欺诈行为，例如错误贴标签和用非认证养殖的野生河鲀鱼产品替代。除了故意欺诈之外，由于河鲀鱼形态特征非常相似，没有经验的消费者在形态学上很难正确识别，特别是经过加工后出售的食品已无法从形态上加以识别。

然而，加工食品通常已经被破坏了形态特征，已无法从形态上有效识别。因此，近几年，人们进行了大量的基于组学的食品真实性鉴别技术研究，包括基因组学、蛋白质组学、代谢组学等分析，以评估食品真实性。基于TaqMan的实时定量聚合酶链式反应(qPCR)在食品真实性鉴别中发挥了重要作用。该方法非常灵敏和特异。此类方法已成功开发用于受欺诈影响的不同材料，例如用于检测杏仁糖中的桃仁，用于检测所谓的“超级食品”奇亚籽和藜麦。以DNA为基础的分子生物学方法仍被认为是食品真实性鉴别中最有效的方法。根据基因进化特点选择合适的靶基因，可实现对物种、同一种物种不同品系的精细区分。

现有技术中未见有效、准确、快速地检测兔头鲀属河鲀鱼成分真实性的方法。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供一种基于TaqMan探针的实时 PCR用于检测食品中兔头鲀属河鲀鱼成分，包括黑腮兔头鲀、兔头鲀、暗鳍兔头鲀、月尾兔头鲀、棕斑兔头鲀的引物和探针、试剂盒及应用。该引物组可特异、灵敏扩增兔头鲀属河鲀鱼成分，该检测方法特异性好、灵敏度高、稳健性好，可以对食品中掺杂着含量低至0.1％的兔头鲀属河鲀鱼成分加以鉴别出来，保障了经认证授权养殖可食用河鲀鱼的食品真实性。

为实现上述目的，本发明采用以下的技术方案：

用于检测兔头鲀属河鲀鱼成分真实性的引物探针组，所述兔头鲀属河鲀鱼，包括黑腮兔头鲀、兔头鲀、暗鳍兔头鲀、月尾兔头鲀、棕斑兔头鲀，所述引物和探针序列如表1所示。

表1本发明中使用的引物和探针

用于检测兔头鲀属河鲀鱼成分真实性的试剂盒，该试剂盒包括如上所述的引物对和探针，在探针的5’端和3’端分别标记报告基团和淬灭基团。

如上所述的试剂盒，优选地，所述试剂盒还包括酶混合物Probe qPCR Mix，型号为Code391A，由TaKaRa Co.,Ltd.公司生产；1μL浓度为 0.4pmol/μL的正向引物；1μL浓度为0.4pmol/μL的反向引物；1μL浓度为 0.4pmol/μL的探针。

用于检测兔头鲀属河鲀鱼成分真实性的方法，包括如下步骤：

S1、从样品中提取DNA；

S2、对步骤S1提取的所述DNA进行实时荧光qPCR扩增；其中，在反应体系中，采用如上所述的用于检测兔头鲀属河鲀鱼成分的引物和探针组；

S3、结果判定：