[发明专利]一种用于预测心肌细胞移植免疫排斥反应的体外实验模型

说明书

本发明属于细胞技术领域，涉及一种用于预测心肌细胞移植免疫排斥反应的体外实验模型，获取目标对象的PBMC细胞，与待移植的iCM细胞；将PBMC与iCM在体外进行间接共培养，iCM接种在Transwell小室的上室，PBMC接种在Transwell小室的下室，培养过程中，上室的培养液与下室的培养液能相互渗透；检测PBMC中T细胞、B细胞和NK细胞的激活与增殖情况；所述PBMC的接种密度2.5*10⁵/ml，所述iCM细胞是经由iPSC或ESC分化而来。该间接共培养方法可有效提高iCM临床应用前预测免疫排斥反应检测结果的准确性，同时，该方法具有重现性高、实验数据波动小等特点。

技术领域

本发明属于细胞技术领域，涉及一种用于预测心肌细胞移植免疫排斥反应的体外实验模型。

背景技术

心脏病治疗中一个提前挑战是心脏病发作后导致部分心肌死亡，心脏无法再生肌肉组织，死亡的肌肉组织还会导致周围的肌肉损伤，进而导致致命的心脏扩张。采用注入心肌细胞代替受损的心肌，是心脏病研究专家所探索的一种治疗心脏疾病的新方向。

在将心肌细胞应用于临床之前，对其可能产生的免疫排斥是必须进行的关键环节；如果直接将生产的心肌细胞用于动物实验或人体实验，其可能免疫排斥反应将不可预期。

因此，在体外进行免疫排斥反应的反应设计，其一是能够降低体内实验的风险性，方便更好的观察心肌细胞本身对心脏系统疾病的治疗效果；其二，能够有效建立临床应用过程中心肌细胞注射的检测指标，以为未来人iPSC来源心肌细胞（iCM）的临床应用提供更加全面的临床前研究证据。

发明内容

本申请提供一种用于预测心肌细胞移植免疫排斥反应的体外实验模型，体外验证模型主要基于PBMC与iCM的间接共培养体系设计实现。该间接共培养方法可有效提高iCM临床应用前预测免疫排斥反应检测结果的准确性，同时，该方法具有重现性高、实验数据波动小等特点。

为实现上述技术目的，本申请采取的技术方案为，一种用于预测心肌细胞移植免疫排斥反应的体外实验模型，获取目标对象的PBMC细胞，与待移植的iCM细胞；将PBMC与iCM在体外进行间接共培养，iCM接种在Transwell 小室的上室，PBMC接种在Transwell 小室的下室，培养过程中，上室的培养液与下室的培养液能相互渗透；检测PBMC中T细胞、B细胞和NK细胞的激活与增殖情况；所述PBMC的接种密度2.5*10⁵/ml，所述iCM细胞是经由iPSC或ESC分化而来。

作为本申请改进的技术方案，将PBMC与iCM基于Transwell体系进行间接共培养，培养时间介于48-96h。

作为本申请改进的技术方案，将PBMC与iCM在体外进行间接共培养时，按梯度设计PBMC与iCM的数量比，并且实验过程中至少选择2个数量比进行检测。

作为本申请改进的技术方案，体外实验模型的建立方式包括初步建立模型与模型验证，以及结果的判定；其中，

初步建立模型，将商品化的PBMC与抗体共培养，筛选最大程度激活PBMC时PBMC的用量，并确认为体外实验模型时PBMC的用量；

模型验证，在初步建立模型的基础上将患者的PBMC与iCM进行间接共培养，比较间接共培养后PBMC中T细胞、B细胞和NK细胞相对于PBMC单独培养状态下T细胞、B细胞和NK细胞的激活状态与增殖情况；

结果的判定，评估阳性对照激活情况、阴性对照激活情况、测试样品激活情况；所述阳性对照组设计为将PBMC单独培养，并在培养基中加入抗体以激活PBMC，检测阳性对照激活情况；所述阴性对照组设计为将PBMC单独培养，检测阴性对照激活情况。

作为本申请改进的技术方案，对结果的判定还包括规定阳性对照中至少有T细胞激活、阴性对照无激活、测试样品中至少一种细胞类型激活的情况判定为预测出现异常免疫反应。