[发明专利]一种贴壁细胞活性检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种贴壁细胞活性检测试剂盒及其应用，涉及生物医药技术领域，该试剂盒包括成分一和成分二，所述成分一包括以下终浓度的组分：5‑10g/100ml的结晶紫溶液，所述成分二包括以下终浓度的组分：至少95(v/v)％浓度的乙醇溶液；所述成分一和成分二所用的溶剂为无菌水。本发明的一种贴壁细胞活性检测试剂盒，在贴壁细胞活力检测上的反应时间短，操作简便、更快速、更安全，成本更低。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体讲是一种贴壁细胞活性检测试剂盒及其应用。

背景技术

CCK8法是一种常见的检测方法，其检测原理为活细胞中的琥珀酸脱氢酶与WST–8进行反应生成黄色甲臜产物，它是一种高度水溶性黄色甲臜染料，黄色甲臜染料的数量与活细胞成正比，因此可以反映活细胞数量；MTT可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成结晶状的深紫色产物formazan。在DMSO存在的情况下，可以被完全溶解。然后通过酶标仪可以测定450nm波长附近的吸光度。细胞增殖越多越快，则吸光度越高，细胞活力越强。

目前常用的CCK8检测试剂盒和MTT检测试剂盒，都会涉及有毒有害溶剂，如DMSO(二甲基亚砜)，且反应相对较慢、需要避光、反应后需尽快检测，因此，亟待开发一种安全无污染且迅速检测的代替产品，以实现贴壁细胞活力的安全、快速、稳定、准确地检测。

结晶紫，是碱性染料，绿色带有金属光泽结晶或深绿色结晶性粉末，为副品红的六甲基衍生物，含有少量四、五甲基的衍生物；其别名：龙胆紫、氯化甲基玫瑰苯胺、甲紫；常用于细胞染色。

发明内容

本发明的目的在于至少解决现有技术中存在的技术问题之一，提供一种贴壁细胞活性检测试剂盒及其应用。

本发明的技术解决方案如下：

一种贴壁细胞活性检测试剂盒，包括成分一和成分二，所述成分一包括以下终浓度的组分：5-10g/100ml的结晶紫溶液，所述成分二包括以下终浓度的组分：至少95(v/v)％浓度的乙醇溶液；所述成分一和成分二所用的溶剂为无菌水。

进一步地，所述成分一的制备方法为：按照组分的终浓度配料，将结晶紫粉末完全溶解，过滤后，于25-30℃的温度下避光保存。

进一步地，所述过滤采用滤膜进行。

进一步地，所述成分二的制备方法为：按照组分的终浓度配料，将乙醇和无菌水混合均匀，于25-30℃的温度下保存。

本发明还公开了一种如上所述的贴壁细胞活性检测试剂盒在贴壁细胞活力检测上的应用。

进一步地，包括以下步骤：

S1：制备贴壁细胞悬液，稀释适当浓度后，接种于96孔细胞培养板中，在37℃，5(v/v)％CO₂培养箱中静置培养8-12小时，待细胞贴壁后进行细胞活力影响处理；

S2：待细胞活力影响处理结束后，弃培养板中的培养基，并在细胞培养板的每孔板中加入成分一继续培养15-30min；

S3：弃所述成分一，用流水轻轻冲洗孔板，晾干；

S4：继续在每孔板中加入组分二震荡3-5min，于570nm波长下进行活力检测。

进一步地，所述细胞活力影响处理为采用药物或病原菌处理或培养时间的控制。

进一步地，所述S1中，每孔板的接种量为100-120μl。

本发明的有益效果是：