[发明专利]一种利用化学交联制备纯化泛素化或类泛素化组蛋白八聚体的方法

权利要求书

1.一种利用化学交联制备纯化泛素化或类泛素化组蛋白八聚体的方法，其特征是，包括以下步骤：

（1）在泛素或类泛素蛋白的N端加上His标签，然后通过大肠杆菌感受态细胞表达纯化得到突变型泛素或类泛素蛋白；所述突变型泛素的C末端为半胱氨酸，所述突变型类泛素蛋白的C末端甘氨酸对应的核苷酸序列突变为半胱氨酸对应的核苷酸序列；

（2）通过大肠杆菌感受态细胞表达纯化得到突变型的组蛋白八聚体；所述突变型的组蛋白八聚体在进行泛素化/类泛素化修饰位点上的赖氨酸突变为半胱氨酸；

（3）利用二氯丙酮或二溴丙酮作为化学交联剂，将突变型泛素或类泛素蛋白与突变型组蛋白八聚体在非变性条件下进行交联反应，具体步骤如下：将突变型泛素或类泛素蛋白和组蛋白八聚体在冰浴条件下混合均匀，再加入二氯丙酮或二溴丙酮，以PBS作为缓冲液，在冰浴和1.5~2.5M氯盐的条件下进行交联反应，反应结束后加入还原剂终止反应，即可得到交联反应产物；

其中，在交联反应中，组蛋白八聚体、突变型泛素或类泛素蛋白和化学交联剂的摩尔比为1：2~10：4~32，pH值为7.0~8.0；

所述氯盐的阳离子选自钠离子或钾离子；所述还原剂选自二硫苏糖醇、β-巯基乙醇中的一种；

（4）将化学交联反应产物依次进行凝胶过滤层析和His亲和柱纯化，即可得到高纯度的泛素化或类泛素化组蛋白八聚体。

2.根据权利要求1所述利用化学交联制备纯化泛素化或类泛素化组蛋白八聚体的方法，其特征是，所述交联反应的时间为1~48小时。

3.根据权利要求2所述利用化学交联制备纯化泛素化或类泛素化组蛋白八聚体的方法，其特征是，所述交联反应中，化学交联剂是二溴丙酮，交联反应的时间为3小时。

4.根据权利要求1至3任一项所述利用化学交联制备纯化泛素化或类泛素化组蛋白八聚体的方法，其特征是，步骤（4）的具体步骤为：将交联反应产物在高速离心后通过凝胶过滤层析，根据分子量大小将未反应的组蛋白八聚体和泛素化/类泛素化组蛋白八聚体与突变型泛素/类泛素化蛋白分开，接下来将两种组蛋白八聚体的混合液高速离心或过滤后，通过His亲和柱除去未反应的组蛋白八聚体，并利用梯度洗脱方法获得高纯度的泛素化/类泛素化组蛋白八聚体。