[发明专利]一种可同时检测甲胎蛋白及其异质体的方法及试剂组合

说明书

本发明涉及物质检测技术领域，特别涉及一种可同时检测甲胎蛋白及其异质体的方法及试剂组合，往血清样本中加入标记有AFP捕获抗体的固相载体，混匀，孵育；往血清样本加入荧光素一标记的AFP检测抗体和荧光素二标记的小扁豆凝集素LCA的混合物，混匀，避光孵育；血清样本采用流式细胞仪检测。与现有技术相比，本发明的可同时检测甲胎蛋白及其异质体的方法及试剂组合同时使用两种荧光素作为标记物，其中一种荧光素标记AFP抗体，另一种荧光素标记小扁豆凝集素LCA，可同时检测AFP和AFP‑L3，且样本无需前处理，可节约时间，提高检测效率和准确度。

【技术领域】

本发明涉及物质检测技术领域，特别涉及一种可同时检测甲胎蛋白及其异质体的方法及试剂组合。

【背景技术】

甲胎蛋白AFP是一种糖蛋白，由约600个氨基酸残基构成，分子量约70kD。甲胎蛋白是一种常用的肿瘤标志物，主要用于对肝癌的辅助诊断。

近年来的研究发现，由于甲胎蛋白糖基化水平不同，根据其与小扁豆凝集素LCA的亲和力，可将总甲胎蛋白分为三部分：AFP-L1、AFP-L2、AFP-L3。其中AFP-L1(LCA弱结合型)来源于良性肝病细胞，AFP-L2(LCA中结合型)主要由卵黄囊产生并多见于孕妇血清，AFP-L3(LCA强结合型)主要来源于肝癌细胞。AFP-L3临床上也被称为甲胎蛋白异质体。

根据国家卫生健康委原发性肝癌诊疗指南(2022年版)2.3节，血清AFP-L3结合总AFP检测有助于肝癌的早期诊断，比单独使用AFP诊断效果更好。

AFP在临床上一般使用双抗体夹心法化学发光免疫分析进行检测，已有多种成熟产品。但检测AFP-L3的产品尚不常见，检测方法也不成熟，一般需要先使用带有小扁豆凝集素LCA的亲和层析柱吸附血清中的AFP-L3，然后再使用传统AFP检测方法对其进行检测。现有技术方法缺陷是：流程较长，步骤较多，检测耗时，且样品预处理会引入更多检测误差，且总AFP还需要另行检测。

【发明内容】

为了克服上述问题，本发明提出一种可有效解决上述问题的可同时检测甲胎蛋白及其异质体的方法及试剂组合。

本发明解决上述技术问题提供的一种技术方案是：提供一种可同时检测甲胎蛋白及其异质体的方法及试剂组合，包括如下步骤：

步骤S1，往血清样本中加入标记有AFP捕获抗体的固相载体，混匀，孵育；

步骤S2，往步骤S1中的血清样本加入荧光素一标记的AFP检测抗体和荧光素二标记的小扁豆凝集素LCA的混合物，混匀，避光孵育；

步骤S3，对步骤S2中的血清样本采用流式细胞仪检测；

步骤S4，荧光素一和荧光素二的信号在不同的荧光通道被流式细胞仪读取，荧光素一报告的信号表征总AFP浓度，荧光素二的信号表征总AFP-L3浓度。

优选地，所述步骤S2中，荧光素对AFP检测抗体和小扁豆凝集素LCA的标记采用直接的共价标记，或者采用生物素-亲和素体系进行间接标记。

优选地，所述步骤S2中，荧光素一标记的AFP检测抗体与微球捕获的各种AFP亚型均结合，荧光素二标记的小扁豆凝集素LCA与微球捕获的AFP-L3特异性结合。

优选地，所述固相载体采用3-10um粒径的捕获微球。

一种可同时检测甲胎蛋白及其异质体的试剂组合，用于可同时检测甲胎蛋白及其异质体的方法中，包括如下组分：

组分一：一种包被抗体的微球；

组分二：荧光素一标记的AFP检测抗体；

组分三：荧光素二标记的小扁豆凝集素LCA。