[发明专利]非洲猪瘟病毒CD2v蛋白B细胞线性表位及应用

说明书

本发明公开了一种非洲猪瘟病毒CD2v蛋白B细胞线性表位，属于生物技术领域。该非洲猪瘟病毒CD2v蛋白B细胞线性表位，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明提供了一种非洲猪瘟病毒CD2v蛋白B细胞线性表位及利用该B细胞线性表位刺激得到的单克隆抗体及其应用，为研究CD2v蛋白胞内区功能以及建立血清学诊断方法提供了新的思考。

技术领域

本发明涉及分子免疫技术领域，涉及一种非洲猪瘟病毒CD2v蛋白B细胞线性表位，及利用该B细胞线性表位刺激得到的单克隆抗体，还涉及该B细胞线性表位的应用及由该B细胞线性表位刺激产生的单克隆抗体的应用。

背景技术

非洲猪瘟病毒(African Swine Fever Virus，ASFV)感染猪，引起以出血和发热为主要特征的非洲猪瘟(African Swine Fever，ASF)疾病。世界动物卫生组织(OIE)列其为法定报告疫病。ASFV主要感染家猪、野猪，也能感染软蜱。高致病性毒株感染可导致猪只4至15天死亡，病死率可达100％；中等毒力毒株引起的亚急性症状，死亡率较低(30-70％)，大部分出现出血性症状；而低毒力毒株病死率较低，导致无血管损伤的慢性疾病。

ASFV属于非洲猪瘟病毒科、非洲猪瘟病毒属。其双股DNA基因组长度在170至194kb之间，是由多基因家族(MGF)不同成员的获得或缺失部分基因所致，包含150多个开放阅读框，编码大约200种蛋白质，包括68个结构蛋白和超过100个非结构蛋白。在形态上，ASFV病毒粒子是一个对称的二十面体粒子，直径约为260nm，具有复杂的多包膜结构，从内到外分别是类核、核壳、内部脂质包膜、二十面体衣壳和外包膜。EP402R基因编码一种与T细胞粘附分子CD2相似的蛋白质，称为CD2v。CD2v包含一个信号肽、胞外的2个免疫球蛋白样结构域、跨膜区及C端147个氨基酸的胞内结构域组装而成的糖蛋白，其中胞内结构域包含1个酸性结构域和1个富含脯氨酸的重复序列。CD2v的胞内结构域与细胞CD2胞质结构域的氨基酸序列没有明显的同一性，此外，共聚焦显微镜结果表明表达的CD2v蛋白结构大部分位于细胞内而不是细胞表面。有研究发现，CD2v通过脯氨酸重复区域与SH3P7相互作用，可能会调节蛋白质运输参与免疫调节。现有技术研究发现，AP-1与CD2v羧基末端(230-304aa)结合形成CD2v-AP-1复合物，对ASFV毒力和免疫逃逸产生影响。因此，ASFV CD2v蛋白是疫苗和相关诊断试剂研发相关的重要靶点。但现有技术中研究较多的均为胞外区和全长CD2v蛋白，并制备了多克隆和单克隆抗体，而缺乏对蛋白胞内区的研究。

发明内容

本发明针对研究较少的CD2v蛋白胞内区，提供了一种抗非洲猪瘟病毒CD2v蛋白单克隆抗体与应用，并筛选出该抗体特异性识别的B细胞线性表位，为研究CD2v蛋白胞内区功能以及建立血清学诊断方法提供了新的思考。

为实现上述发明目的，本发明采用了如下技术方案：

本发明第一方面，提供一种非洲猪瘟病毒CD2v蛋白B细胞线性表位，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明第二方面，提供了所述非洲猪瘟病毒CD2v蛋白B细胞线性表位在制备检测或预防非洲猪瘟病毒的试剂中的用途。

本发明第三方面，提供一种抗非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的单克隆抗体，所述单克隆抗体能够与所述非洲猪瘟病毒CD2v蛋白B细胞线性表位特异性结合。

优选地，所述单克隆抗体重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。

本发明第四方面，提供一种编码所述单克隆抗体的核酸分子。

优选地，编码重链可变区的核酸序列如SEQ ID NO.2所示，编码轻链可变区的核酸序列如SEQ ID NO.3所示。

本发明第五方面，提供一种包括所述核酸分子的表达载体。