[发明专利]转基因马铃薯PH05-026-0048的实时荧光检测引物、方法和试剂盒

权利要求书

1.一种转基因马铃薯PH05-026-0048特异性实时荧光PCR检测引物组，包括检测引物和检测探针，其特征在于：

所述的检测引物如下所示：

PH05-026-0048-3F：5’-GACGTCCGCAATGTGTTATTAAGTT-3’；

PH05-026-0048-3R：5’-TGTACTTCCAGTTCCCAATTGACTAC-3’；

所述的检测探针如下所示：

PH05-026-0048-3P：5’-AAGTTGTCCTTGGTTTTAT-3’，探针的5’端标记有荧光报告基团，3'端标记有荧光淬灭基团。

2.根据权利要求1所述的转基因马铃薯PH05-026-0048特异性实时荧光PCR检测引物组，其特征在在于，所述的荧光报告基团为VIC，所述的荧光淬灭基团为BHQ1。

3.一种转基因马铃薯PH05-026-0048特异性实时荧光PCR检测试剂盒，包括实时荧光定量PCR反应液、耐热DNA聚合酶、检测引物和检测探针，其特征在于：

所述的检测引物如下所示：

PH05-026-0048-3F：5’-GACGTCCGCAATGTGTTATTAAGTT-3’；

PH05-026-0048-3R：5’-TGTACTTCCAGTTCCCAATTGACTAC-3’；

所述的检测探针如下所示：

PH05-026-0048-3P：5’-AAGTTGTCCTTGGTTTTAT-3’，探针的5’端标记有荧光报告基团，3'端标记有荧光淬灭基团。

4.根据权利要求3所述的转基因马铃PH05-026-0048薯特异性实时荧光PCR检测试剂盒，其特征在在于，所述的荧光报告基团为VIC，所述的荧光淬灭基团为BHQ1。

5.一种转基因马铃薯PH05-026-0048特异性实时荧光PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取待测样品的基因组DNA作为模板；

(2)加入权利要求1所述的检测引物和检测探针，与实时荧光定量PCR反应液及耐热DNA聚合酶混合形成扩增反应体系；

(3)将扩增反应体系在荧光PCR仪上进行实时荧光PCR反应，反应结束后，根据扩增曲线判断样品是否为转基因马铃薯PH05-026-0048。

6.根据权利要求5所述的转基因马铃薯PH05-026-0048特异性实时荧光PCR检测方法，其特征在于，所述的步骤(3)的根据扩增曲线判断样品是否为转基因马铃薯PH05-026-0048的标准为：如果扩增曲线有典型荧光扩增曲线，则说明样品为PH05-026-0048转基因马铃薯；如果扩增曲线无典型荧光扩增曲线，则说明样品不是转基因马铃薯PH05-026-0048。

7.根据权利要求5所述的转基因马铃薯PH05-026-0048特异性实时荧光PCR检测方法，其特征在于，所述的步骤(2)的扩增反应体系为：25μL，包括Premix Ex Taq 12.5μL，ROXReference Dye II 0.2μL，10μmol/L检测引物PH05-026-0048-3F 0.5μL，10μmol/L检测引物PH05-026-0048-3R 0.5μL，10μmol/L检测探针PH05-026-0048-3P 0.5μL，DNA模板2μL和ddH2O 8.8μL；所述的步骤(3)的实时荧光PCR反应，其反应程序为95℃30s；95℃5s、60℃34s，40个循环，于60℃收集荧光信号。