[发明专利]一种改进型髓鞘染色试剂盒及其染色方法

说明书

本发明公开了一种改进型髓鞘染色试剂盒及其染色方法，一种改进型髓鞘染色试剂盒，包括染色剂、染色终止剂与中性树胶封片剂；本发明在氯化金染色方法的基础上进行配方和染色方法的改良，具有快速简便、染色效果清晰准确、特异性更高、可重复性好、用量节省、可长久保存、对人体无毒害作用等特点，利用此染色试剂盒可以将髓鞘染成黑紫色，清楚地展现出神经系统髓鞘的形态特征，且所染标本不易脱色，可长久保存。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种改进型髓鞘染色试剂盒及其染色方法。

背景技术

脱髓鞘疾病是一类以神经系统多灶性髓鞘脱失、炎性细胞浸润为主要病理特征的自身免疫系统疾病。可发生于外周和中枢神经系统，是神经学中最普遍、致残率最高的疾病之一。临床常见的脱髓鞘疾病包括帕金森、白质中风、脑瘫、视神经脊髓炎以及多发硬化等。感染、中毒、营养缺乏都可以引起继发的神经髓鞘脱失，正常生理条件下，髓鞘脱失后机体会自发地进行髓鞘再生，但在病理条件下，该过程会因多种因素被抑制，导致髓鞘再生不完全或失败，使脱髓鞘发展，病情持续加重。脱髓鞘性疾病在神经性学中相对普遍且致残率高，髓鞘染色在脱髓鞘疾病的病理诊断和研究中具有重要作用，可用于检测髓鞘发育情况和脱髓鞘以及髓鞘修复的程度。

现有髓鞘染色方法包括Luxol Fast Blue(LFB)染色、油红O染色、苏丹黑染色、银染色以及通过髓鞘相关蛋白MBP、PLP、MAG等的免疫组织化学染色等。传统髓鞘染色方法中普遍存在普适性不足、特异性差、敏感度低、操作复杂、难以长久保存或试剂对人体有毒害作用等缺点，如Luxol Fast Blue法对染色特异性差；苏丹黑染色对大的纤维束染色效果好但对于单根的有髓鞘纤维染色不灵敏，并且染色时间要求2～8d，时间成本巨大；银染色抗髓鞘基础蛋白(MBP)法对于单根有髓鞘纤维不灵敏。

Schmued等发明氯化金染色法，能够高度特异、高度敏感地将髓鞘清晰地显示出来，但该方法不稳定，不能进行髓鞘染色的定量分析，虽然现有技术将氯化金染色法进行改良，但该方法仅适用于冰冻切片，不能进行石蜡切片中的髓鞘成分进行特异性染色。

发明内容

本发明提供了一种改进型髓鞘染色试剂盒及其染色方法，以解决现有技术的上述问题。

本发明的方案是：

一种改进型髓鞘染色试剂盒，包括染色剂、染色终止剂与中性树胶封片剂，所述染色剂和染色终止剂均为五倍浓度浓缩液，保存在棕色不透光试剂瓶中；所述染色剂包括四氯化金水合物、氯化亚金水合物、氯化钠、无水磷酸氢二钠与无水磷酸二氢钠；所述染色终止剂包括无水硫代硫酸钠与去离子水；所述中性树胶封片剂包括中性树胶与二甲苯。

作为优选的技术方案，所述四氯化金水合物在染色剂中的占百分比为0.1～0.3％，所述氯化亚金水合物在染色剂中的占百分比为0.05～0.2％，所述氯化钠在染色剂中的占百分比为0.5～1％，所述无水磷酸氢二钠在染色剂中的占百分比为0.3～0.5％，所述无水磷酸二氢钠在染色剂中的占百分比为0.02～0.03％。

作为优选的技术方案，所述染色终止剂包括无水硫代硫酸钠，所述无水硫代硫酸钠在染色终止剂中的占百分比为0.5～5％。

作为优选的技术方案，所述中性树胶封片剂包括中性树胶与二甲苯，所述中性树胶在中性树胶封片剂中的占百分比为40～50％，所述二甲苯在中性树胶封片剂中的占百分比为50～60％。

本发明还公开了一种改进型髓鞘染色试剂盒的染色方法，包括下列步骤：

1)正常石蜡切片，将样品的切片至5-8μm，贴在载玻片上；

2)切片干燥后，将切片置于60℃烘干20分钟；

3)脱蜡，将切片置于二甲苯中浸泡10分钟，10分钟后更换新的二甲苯再次浸泡10分钟；