[发明专利]用于磁微粒免疫层析快速反应方法的单克隆抗体

权利要求书

1.一种针对Twist1蛋白的单克隆抗体，其特征在于为Twist7G3单克隆抗体，其轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，Twist7G3单克隆抗体重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.一种针对Twist1蛋白的单克隆抗体，其特征在于为Twist4D1单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，Twist4D1单克隆抗体重链可变区的氨基酸序列如SEQID NO.4所示。

3.如权利要求1和2的针对Twist1蛋白的单克隆抗体的组合在制备用于样品中Twist1蛋白检测的磁微粒免疫层析快速检测试剂盒中的用途。

4.一种针对Twist1蛋白检测的磁微粒免疫层析快速检测试剂盒，其特征在于所述Twist1蛋白的磁微粒免疫层析快速检测试剂盒含有针对Twist1蛋白的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体是Twist7G3单克隆抗体作为磁珠标记抗体和Twist4D1单克隆抗体作为T线抗体；并且，Twist7G3单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，Twist7G3单克隆抗体重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；Twist4D1单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，Twist4D1单克隆抗体重链可变区的氨基酸序列如SEQID NO.4所示。

5.如权利要求4所述的试剂盒的制备方法，其特征在于包括如下步骤：更进一步的，所述磁微粒免疫层析快速检测试剂盒的制备方法包括如下步骤：

样品垫的制备：样品垫是经过样品垫处理液预处理的玻璃纤维素膜；预处理液的组成为0.5%TritonX-100 +0.5%BSA 溶于0.01M PBS 中，pH7.4；

磁珠标记：取2mg磁珠，用500μl 添加0.05%Tween-20 PH5的10mM的MEST缓冲液洗涤3次并重悬于500μlMES缓冲液中，加入2.5mg的EDC和NHS，25℃偶联4h；用pH9的添加0.05%Tween-20的5mM的BST缓冲液洗涤磁珠2次并重悬于500μlBST缓冲液中，再加入200μg的Twist7G3单抗；20℃偶联过夜，期间在垂直旋转混合仪上不断摇动混匀；用磁力架吸附磁珠洗涤，加入含有3% BSA的BST溶液中，封闭过夜，最后将洗涤后的磁珠重悬于保存液中；保存缓冲液：pH9的5mMBST缓冲液，0.05%Tween-20，0.01%NaN3，0.1%BSA；

结合垫的制备： 将制备好的磁珠用移液器取5μl 的磁珠点在结合垫上， 在 20-25℃下通风干燥6h，制成免疫磁珠垫；

选用2mg/ml浓度羊抗小鼠的抗体包被试纸条上的C线作为质控线;选用2mg/ml的Twist4D1单抗包被试纸条上的T线,作为检测线;

磁性免疫层析试纸条的组装：室温下，在PVC板上将制备好的样品垫，结合垫，NC膜及吸水垫按次序搭接2mm，在Biodot高速试纸条斩切机上切割成4mm宽的试纸条，存放于密封袋中。