[发明专利]抗SARS-COV-2纳米抗体、制备方法及其应用

权利要求书

1.抗SARS-COV-2纳米抗体，其特征在于：

包括抗体1和/或抗体2；

至少两个所述抗体1/抗体2之间或所述抗体1和抗体2之间由连接子连接起来或与Fc标签进行融合表达，组成抗SARS-COV-2纳米抗体；

所述抗体1的互补决定区由CDR1和CDR3组成；

所述CDR1为SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列，所述CDR3为SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列；

或，所述CDR1为SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列，所述CDR3为SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的抗SARS-COV-2纳米抗体，其特征在于：

所述抗体2为SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的核酸序列。

3.根据权利要求1所述的抗SARS-COV-2纳米抗体，其特征在于：

抗体1还包括高变区HV2、HV4、骨架区FR1、FR2和FR3；

所述HV2为SEQ ID NO.7或SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列；

所述HV4为SEQ ID NO.9或SEQ ID NO.10所示的氨基酸序列；

所述FR1为SEQ ID NO.11或SEQ ID NO.12所示的氨基酸序列；

所述FR2为SEQ ID NO.13或SEQ ID NO.14所示的氨基酸序列；

所述FR3为SEQ ID NO.15或SEQ ID NO.16所示的氨基酸序列。

4.根据权利要求1所述的抗SARS-COV-2纳米抗体，其特征在于：

抗体1的氨基酸序列如SEQ ID NO.17或SEQ ID NO.18所示；

所述抗体1的核酸序列如SEQ ID NO.19或SEQ ID NO.20所示。

5.核酸分子，其特征在于：

所述核酸分子包括编码权利要求1-5任一项所述抗SARS-COV-2纳米抗体的核酸序列。

6.重组载体，其特征在于：

所述重组载体包括权利要求5所述的核酸分子；

所述重组载体为毕赤酵母表达载体转化入毕赤酵母进行表达。

7.重组细胞，其特征在于：

所述重组细胞包括权利要求5所述的核酸分子或权利要求6所述的重组载体。

8.权利要求1-4任一项所述的抗SARS-COV-2纳米抗体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

(1)使用SARS-CoV-2S1蛋白免疫条纹斑竹鲨，分离免疫后条纹斑竹鲨的外周血单核细胞并提取总RNA，以所述RNA为模板逆转录制备cDNA；

(2)以所述cDNA为模板，PCR扩增纳米抗体可变区，构建噬菌体展示文库；

(3)在所述噬菌体展示文库中筛选具有SARS-CoV-2抗原特异性的噬菌体抗体，并进行测序，获得抗体1和抗体2的核酸序列；

(4)利用抗体1和抗体2的核酸序列，结合连接子或Fc标签构建表达载体，并转入细胞进行表达及纯化，得到存化后的抗SARS-COV-2纳米抗体。

9.药物组合物，其特征在于：

所述药物组合物包括权利要求1-4任一项所述的抗SARS-COV-2纳米抗体、权利要求5所述的核酸分子、权利要求6所述的重组载体、权利要求7所述的重组细胞中的任意一种或至少两种的组合；

所述药物组合物还包括药学上可接受的载体。

10.如权利要求1-4任一项所述的抗SARS-COV-2纳米抗体、权利要求5所述的核酸分子、权利要求6所述的重组载体、权利要求7所述的重组细胞、权利要求9所述的药物组合物在制备抗SARS-CoV-2药物中的应用。