[发明专利]一种在大肠杆菌中表达生产Terrequinone A的基因组合及其应用

权利要求书

1.一种在大肠杆菌中表达生产Terrequinone A的基因组合，其特征在于，所述基因组合包括tdiAS基因、tdiBS基因、tdiCS基因、tdiDS基因、tidES基因、sfpS基因、ScCKS基因和AtIPKS基因，其中，所述tdiAS基因、tdiBS基因、tdiCS基因、tdiDS基因、tidES基因、sfpS基因、ScCKS基因和AtIPKS基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1～8所示。

2.一种用于生产Terrequinone A的重组质粒pC02，其特征在于，所述重组质粒pC02由基因表达盒T7 tdiAS、T7 tdiBS、T7 tdiCS、T7 tdiDS、T7 tidES、T7 sfpS按顺序串联并连接到大肠杆菌表达载体上构建而成，其中，所述基因表达盒T7 tdiAS、T7 tdiBS、T7 tdiCS、T7 tdiDS、T7 tidES、T7 sfpS由核苷酸序列如SEQ ID NO.1～6所示的tdiAS基因、tdiBS基因、tdiCS基因、tdiDS基因、tidES基因、sfpS基因分别与T7启动子和终止子连接而成。

3.根据权利要求2所述的重组质粒pC02，其特征在于，所述大肠杆菌表达载体为pCAMBIA1301。

4.一种用于生产Terrequinone A合成所需原料二甲基烯丙基焦磷酸DMAPP的重组质粒pU03，其特征在于，所述重组质粒pU03由基因表达盒T7 ScCKS和T7 AtIPKS按顺序串联并连接到大肠杆菌表达载体上构建而成，其中，所述基因表达盒T7 ScCKS和T7 AtIPKS由核苷酸序列如SEQ ID NO.7～8所示的ScCKS基因和AtIPKS基因分别与T7启动子和终止子连接而成。

5.根据权利要求4所述的重组质粒pU03，其特征在于，所述大肠杆菌表达载体为pUC19。

6.一种可生产Terrequinone A的重组大肠杆菌的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：对tdiA基因、tdiB基因、tdiC基因、tdiD基因、tidE基因、sfp基因、ScCK基因和AtIPK基因按大肠杆菌表达模式优化，分别获得核苷酸序列如SEQ ID NO.1～8所示的tdiAS基因、tdiBS基因、tdiCS基因、tdiDS基因、tidES基因、sfpS基因、ScCKS基因和AtIPKS基因，将所述八个基因分别与T7启动子和终止子连接，构建基因表达盒T7 tdiAS、T7 tdiBS、T7 tdiCS、T7 tdiDS、T7 tidES、T7 sfpS、T7 ScCKS和T7 AtIPKS；

S2：将步骤S1获得的六个基因表达盒T7 tdiAS、T7 tdiBS、T7 tdiCS、T7 tdiDS、T7tidES和T7 sfpS按顺序串联并连接入大肠杆菌表达载体，获得含tdiAS、tdiBS、tdiCS、tdiDS、tidES和sfpS的六个基因表达盒的重组质粒pC02；

S3：将步骤S1获得的两个基因表达盒T7 ScCKS和T7 AtIPKS按顺序串联并连接入大肠杆菌表达载体，获得含ScCKS和AtIPKS的两个基因表达盒的重组质粒pU03；

S4：将步骤S2获得的重组质粒pC02和步骤S3获得的重组质粒pU03同时转化到大肠杆菌中，获得一种可生产Terrequinone A的重组大肠杆菌。

7.根据权利要求6所述重组大肠杆菌的制备方法，其特征在于，步骤S2中，将六个基因表达盒T7 tdiAS、T7 tdiBS、T7 tdiCS、T7 tdiDS、T7 tidES和T7 sfpS按顺序串联，并在T7tdiAS的5’-端连接EcoRⅠ内切酶位点，在T7 sfpS的3’-端连接HindⅢ内切酶位点，获得EcoRⅠ-T7 tdiAS-T7tdiBS-T7 tdiCS-T7 tdiDS-T7 tidES-T7 sfpS-HindⅢ。