[发明专利]一种蛋白质免疫印迹膜去除液及其方法

说明书

本发明属于抗原抗体检测技术领域，具体涉及一种蛋白质免疫印迹膜去除液及其方法。所述蛋白质免疫印迹膜去除液包括胰蛋白酶。本发明意外发现，胰蛋白酶可以从免疫印迹膜中彻底、高效地去除一抗二抗复合物，使原有印迹可以被清除，而且还可以再次检测的印迹膜上面的新抗原，结果可靠，因此可以达到良好的再次重复使用印迹膜的目的。通过本方法，可以无需为了对不同靶标的检测而进行多次凝胶电泳，从而避免浪费稀少或昂贵的样品。

技术领域

本发明属于抗原抗体检测技术领域，具体涉及一种蛋白质免疫印迹膜去除液及其方法。

背景技术

免疫印迹法 (Western blotting；WB) 是一种将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析技术相结合的杂交技术。通俗来讲，将蛋白质通过电转固相到膜上，然后利用抗体检测蛋白表达的方法, 亦被称为Western blot。实验原理即是: 蛋白研究样品通过恒定电压或电流电泳经过PAGE胶，由于各蛋白所带分子量携带电荷不同而产生不同的电泳速度而被分离。通过电转移固相到印迹膜，印迹膜以非共价键形式吸附蛋白质，然后通过与一抗, 二抗等的结合,经过底物化学发光显色以检测电泳分离的蛋白成分或蛋白水平的表达。

另外,为了节约时间和经费，因此印迹膜的如何重复利用成为了科研人员关注的重要问题。重复利用指的是可以在显影定影完成以后,重新用洗脱液（stripping buffer）洗脱，然后再次封闭检测新的抗原，继续一抗及二抗孵育，化学发光显影。

目前，现有技术报道了多种用于印迹膜重复使用的stripping buffer（中文翻译为：洗脱液；再生液；去除液）, 其中用于灭活HRP活性的方法，包括 H₂O₂ ，叠氮化钠，3,3-二氨基联苯胺或 Vector SG和乙酸，但这些方法有其自身的局限性。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术存在的缺点和不足，而提供一种蛋白质免疫印迹膜去除液及其方法。

本发明所采取的技术方案如下：一种蛋白质免疫印迹膜去除液，其包括胰蛋白酶。

其为质量百分比为0.1%-0.25%的胰蛋白酶溶于ddH₂O中制备得到，pH值为7.0~7.4。

一种蛋白质免疫印迹膜印迹去除方法，其包括以下步骤：

（1）将蛋白质免疫印迹膜用ddH₂O漂洗；

（2）将步骤（1）漂洗后的蛋白质免疫印迹膜转移到如上所述的蛋白质免疫印迹膜去除液中，于40℃处理30min；

（3）将步骤（2）处理后的蛋白质免疫印迹膜用ddH₂O漂洗。

所述蛋白质免疫印迹膜通过如上所述的蛋白质免疫印迹膜去除液重复剥膜次数不超过2次。

本发明的有益效果如下：本发明意外发现，胰蛋白酶可以从免疫印迹膜中彻底、高效地去除一抗二抗复合物，使原有印迹可以被清除，而且还可以再次检测的印迹膜上面的新抗原，结果可靠，因此可以达到良好的再次重复使用印迹膜的目的。通过本方法，可以无需为了对不同靶标的检测而进行多次凝胶电泳，从而避免浪费稀少或昂贵的样品。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，根据这些附图获得其他的附图仍属于本发明的范畴。

图1为使用斑点印记方法进行检测的结果，A、B、C、D分别为在不同去除液去除条件进行去除前后的对比；

图2为将电转移蛋白后的NC膜分为2种处理方法进行处理的对比结果；其一是常规方法继续后面抗原检测 (图2.A; B)，另一种方法是将NC膜进行30min的0.1%胰蛋白酶处理后，继续进行后续抗原检测(图2.C; D)；