[发明专利]一种肿瘤疫苗及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种肿瘤疫苗及其制备方法和应用，属于生物医药技术领域。该肿瘤疫苗包括肿瘤死细胞和免疫佐剂；所述免疫佐剂通过化学键合的方式连接在肿瘤死细胞表面，或者包载在纳米载体中再通过化学键合的方式连接在肿瘤死细胞表面。本发明的肿瘤疫苗在最大程度保留肿瘤细胞抗原完整性的同时，可借助细胞及蛋白/核酸本身体内降解代谢时间的差异性延长抗原及免疫佐剂的体内滞留时间；此外，在制剂学层面，通过共价键链的方法将免疫佐剂修饰至死细胞表面可实现肿瘤疫苗在注射到体内后抗原及免疫佐剂在时间及空间上的一致性，进而提高提呈细胞对抗原和佐剂的共摄取。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种基于肿瘤死细胞的肿瘤疫苗及其制备方法和应用。

背景技术

癌症免疫治疗是目前肿瘤治疗中的热点，其中肿瘤疫苗主要是通过将肿瘤抗原配合免疫佐剂注入患者体内，克服肿瘤引起的免疫抑制状态，增强免疫原性，激活患者自身的免疫系统，诱导机体细胞免疫和体液免疫应答，从而达到控制或清除肿瘤的目的，是一种治疗性的疫苗。

迄今为止，各种形式的肿瘤疫苗已在数百项临床试验中进行了测试。2010年，通过肿瘤抗原/佐剂融合蛋白在体外激活自体树突状细胞（DC）疫苗被批准用于治疗耐药前列腺癌，这是迄今为止FDA批准的唯一一种癌症疫苗。然而，基于DC的疫苗需要大量的体外分离和激活步骤，使得批次间的质量相对难以控制，此外，DC疫苗由于在加工过程中细胞活力减弱，临床反应较低。因此，直接由肿瘤抗原和佐剂组成的癌症疫苗在制造和质量标准化方面会更加便捷有效。

目前，基于肿瘤抗原与免疫佐剂的肿瘤疫苗开发主要是将两者简单混合，具体方式可利用特定的一种或多种肿瘤特异性抗原（蛋白或核酸）与免疫佐剂混合制成肿瘤蛋白疫苗或肿瘤核酸疫苗，或者将肿瘤细胞制成裂解液再与免疫佐剂混合制成全细胞肿瘤疫苗。然而，由于肿瘤抗原的免疫原性普遍较差，在体内对于抗原提呈细胞（APC）的激活效果较弱，基于上述两种技术的肿瘤疫苗目前并未有已获批的商用产品。通过制剂学手段及方法提高体内抗原提呈细胞对肿瘤抗原的高效摄取及提呈是提高这类癌症疫苗体内药效的关键。经调研，肿瘤抗原的完整性、抗原/免疫佐剂在体内的长滞留性以及抗原提呈细胞对抗原和佐剂的共摄取是关键因素。

针对肿瘤疫苗的如上特点，本发明设计了一种基于肿瘤死细胞的肿瘤疫苗，在最大程度保留肿瘤细胞抗原完整性的同时，可借助细胞及蛋白/核酸本身体内降解代谢时间的差异性延长抗原及免疫佐剂的体内滞留时间；此外，在制剂学层面，通过共价键链的方法将免疫佐剂修饰至死细胞表面可实现肿瘤疫苗在注射到体内后抗原及免疫佐剂在时间及空间上的一致性，进而提高提呈细胞对抗原和佐剂的共摄取。通过上述几项制剂学的设计，可最大程度发挥肿瘤疫苗的免疫激活作用及抗肿瘤药效。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种基于肿瘤死细胞的肿瘤疫苗。所述肿瘤疫苗中免疫佐剂以共价键链的方式连接在肿瘤死细胞表面，以实现抗原提呈细胞对抗原及免疫佐剂的共摄取。

所述免疫佐剂，可直接通过化学键合的方式修饰至死细胞表面，也可先包载于脂质体、纳米粒、胶束等载体中再通过化学键链的方式修饰至死细胞表面。

所述肿瘤死细胞，可为一种肿瘤活细胞的死细胞，亦可为两种及两种以上肿瘤活细胞的混合死细胞。

所述免疫佐剂选自粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、白细胞介素-l、白细胞介素-2、干扰素-γ、氢氧化铝、明矾、双链多聚肌苷酸、胞苷酸、双链多聚腺苷酸、脂多糖、单磷酰脂质A、角鲨烯、咪喹莫特或弗氏佐剂。