[发明专利]一种快速鉴别蜜蜂属六种蜜蜂蜂蜜的蜂种来源的方法

权利要求书

1.一种快速鉴别蜜蜂属六种蜜蜂蜂蜜的蜂种来源的方法，其特征在于，通过如下步骤实现：

(1)提取蜂蜜的基因组DNA；

(2)以SEQ ID No.1和SEQ ID No.2为引物序列，步骤(1)得到的基因组DNA为模板，进行PCR扩增，得到大小为470～479bp的16S rRNA基因片段；

(3)采用限制性核酸内切酶AseI对步骤(2)得到的16S rRNA基因片段进行酶切，4％琼脂糖凝胶电泳，并对电泳结果进行拍照、分析。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，提取蜂蜜DNA前处理为15g蜂蜜加30mL蒸馏水溶解稀释，45℃水浴孵育10min，涡旋振荡后，10000r/min离心30min，弃上清，随后将沉淀悬浮于1mL超纯水中，12000r/min离心15min，弃上清，沉淀物保存在-80℃直至DNA提取。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，PCR扩增程序参数设置如下：94℃预变性2min；94℃变性30s，50℃退火30s，72℃延伸30s，30个循环；72℃终延伸5min。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，采用AseI对步骤(2)得到的16SrRNA基因片段进行酶切的方法为：加入限制性内切酶AseI，37℃反应2小时，然后65℃孵育20min，以灭活AseI。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，电泳结果同时具有414bp和60bp条带的为意蜂蜂蜜，同时具有219bp、202bp和54bp条带的为中蜂蜂蜜，同时具有217bp、125bp、60bp、38bp和30bp条带的为黑大蜜蜂蜂蜜，同时具有175bp、128bp、60bp和46bp条带的为大蜜蜂蜂蜜，同时具有249bp、165bp和60bp条带的为小蜜蜂蜂蜜，同时具有250bp和229bp条带的为黑小蜜蜂蜂蜜。

6.权利要求1所述方法在快速鉴别蜜蜂属六种蜜蜂蜂蜜的蜂种来源中应用。