[发明专利]一种鱼皮胶原蛋白/SVF光交联复合水凝胶及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种鱼皮胶原蛋白/SVF光交联复合水凝胶，其特征在于，主体结构为以鱼皮胶原蛋白为原料制得的内部均匀包裹SVF的三维交联网络结构的水凝胶。

2.一种鱼皮胶原蛋白/SVF光交联复合水凝胶的制备方法，其特征在于，具体步骤包括：

(1)制备水凝胶前驱体溶液：

将鱼皮胶原蛋白溶于溶剂中，得胶原蛋白溶液，向胶原蛋白溶液中添加甲基丙烯酸水溶液进行接枝反应，得到鱼皮胶原蛋白接枝溶液FC-MA；用光引发剂溶解FC-MA，得到水凝胶前驱体溶液，将水凝胶前驱体溶液置于透析袋中透析；

(2)制备复合水凝胶：

将脂肪血管基质组分SVF置于经过透析后的水凝胶前驱体溶液中混合均匀，在紫外光照射下成胶，即得鱼皮胶原蛋白/SVF光交联复合水凝胶。

3.根据权利要求2所述的鱼皮胶原蛋白/SVF光交联复合水凝胶的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中溶剂为PBS缓冲液，鱼皮胶原蛋白与PBS缓冲液的质量体积比为0.1-0.4g:1mL。

4.根据权利要求2所述的鱼皮胶原蛋白/SVF光交联复合水凝胶的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中鱼皮胶原蛋白溶液与甲基丙烯酸水溶液的体积比为1mL:0.2mL，接枝反应温度为60℃，接枝反应时间为1h；所述光引发剂为Lap引发剂；所述步骤(1)中透析时间为3天。

5.根据权利要求2所述的鱼皮胶原蛋白/SVF光交联复合水凝胶的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中SVF与水凝胶前驱体溶液的质量体积比为0.1-0.3g:1mL；所述步骤(2)中紫外交联时间为2min。

6.根据权利要求2所述的鱼皮胶原蛋白/SVF光交联复合水凝胶的制备方法，其特征在于，所述鱼皮胶原蛋白的制备方法如下：

(a)制备脱细胞鱼皮胶原蛋白基质

用蒸馏水对罗非鱼鱼皮进行反复清洗并进行修剪预处理；首先将鱼皮低温冷冻，室温溶解，反复多次上述操作以加速细胞结构破碎；其次，将鱼皮依次置于高渗溶液与蒸馏水中浸泡，将细胞膜破裂，得脱细胞鱼皮；最后将脱细胞鱼皮置于胰蛋白酶溶液中，用磁力搅拌机充分搅拌、溶解，胰蛋白酶通过作用于鱼皮胶原蛋白精氨酸和赖氨酸C端的多肽键，加速细胞碎片排出，反复清洗，得到脱细胞鱼皮胶原蛋白基质；

(b)提取鱼皮胶原蛋白

将脱细胞鱼皮胶原蛋白基质加入含有溶剂的烧杯中，并置于水浴锅中加热搅拌，待其完全溶解后，将液体置于离心机离心，取上清液，真空冷冻干燥机冻干样品，即得鱼皮胶原蛋白。

7.根据权利要求2所述的鱼皮胶原蛋白/SVF光交联复合水凝胶的制备方法，其特征在于，所述SVF的制备方法为：

将抽取的脂肪组织静置后去除下层液体部分，进行第一次离心，弃去下层液体部分，保留中层脂肪即Coleman脂肪组织及上层油脂；将Coleman脂肪组织及油脂混合，通过脂肪切割器在2个注射器之间推注转换获得乳糜状脂肪，进行第二次离心后油层下方的凝胶状物质即为SVF。

8.根据权利要求6所述的鱼皮胶原蛋白/SVF光交联复合水凝胶的制备方法，其特征在于，所述步骤(a)中低温冷冻温度为-60℃至-80℃，重复次数为3-5次；

高渗溶液的制备方法为：将氯化钠固体溶于超纯水中，氯化钠固体和超纯水的质量体积比为100g:1000mL；

胰蛋白酶溶液的制备方法为：将胰蛋白酶溶于超纯水中，胰蛋白酶和超纯水的质量体积比为1-4g:1000mL；

脱细胞鱼皮与胰蛋白酶溶液的质量体积比为100g:1000mL；

磁力搅拌器搅拌时间为40-60min，搅拌速度为1000r/min。

9.根据权利要求6所述的鱼皮胶原蛋白/SVF光交联复合水凝胶的制备方法，其特征在于，所述步骤(b)中溶剂为超纯水，脱细胞鱼皮胶原蛋白基质与超纯水的质量体积比为100g:1000mL；加热温度为55℃，加热时间为1-4h，磁力旋转速度为1000r/min；离心机转速为2000r/min，离心时间为20min。

10.权利要求1所述或权利要求2制备的鱼皮胶原蛋白/SVF光交联复合水凝胶在制备促进伤口愈合材料中的应用。