[发明专利]一种半乳糖苷酶响应的叶绿素脂质体纳米光声探针及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种半乳糖苷酶响应的叶绿素脂质体纳米光声探针，其特征在于，所述叶绿素脂质体纳米光声探针为焦脱镁叶绿酸-a-半乳糖-脂质体(PPA-galactose-LP)纳米光声探针。

2.根据权利要求1所述的半乳糖苷酶响应的叶绿素脂质体纳米光声探针，其特征在于，由脂质体(LP)和光声探针(PPA-galactose)通过自组装形成的水溶性纳米光声探针(PPA-galactose-LP)。

3.根据权利要求1或2所述的半乳糖苷酶响应的叶绿素脂质体纳米光声探针，其特征在于，所述纳米光声探针的直径在80～120nm。

4.一种根据权利要求1-3任一所述的半乳糖苷酶响应的叶绿素脂质体纳米光声探针的制备方法，其特征在于，包括

(1)光声探针PPA-galactose酶解单元与光声单元的合成，其具有式(I)所示的化学结构式：

如式(I)所示化合物的制备方法，包括以下步骤：

(1.1)取对羟基苯甲醛和氧化银溶于乙腈中，加入四乙酰基-α-D-溴代半乳糖避光氮气保护反应得到中间产物2；提纯后的中间产物2溶于氯仿和异丙醇中，氮气保护，通过硼氢化钠还原得到中间产物3；将中间产物3、对硝基苯基氯甲酸酯和三乙胺在有机溶剂中反应得到中间产物4；

(1.2)焦脱镁叶绿酸-a和N-Boc-乙二胺在碳二亚胺盐酸盐与N-羟基琥珀酰亚胺的催化下反应得到中间产物6，DCM溶解产物6后加入三氟乙酸避光脱掉叔丁氧羰基保护基团，得到中间产物7；

(1.3)中间产物4和中间产物7在N,N-二甲基甲酰胺和吡啶中，添加1-羟基苯并三唑和N,N-二异丙基乙胺避光反应得到中间产物8，最后在甲醇溶液中通过5％水合肼脱去乙酰基得到终产物9，即PPA-galactose；

(2)纳米光声探针(LP-PPA-galactose)的制备：将制备的PPA-galactose与脂质体(胆固醇、DSPC、DSPE-PEG 2000)溶解在氯仿中，通过旋转蒸发法去除有机溶剂，加入PBS后超声，最后经过脂质体挤压得到PPA-galactose-LP悬浮液；

反应方程式如下：

5.根据权利要求4所述的半乳糖苷酶响应的叶绿素脂质体纳米光声探针的制备方法，其特征在于，步骤(1.1)中纯化具体过程为：乙酸乙酯洗涤过滤，收集洗液，通过柱色谱层析，石油醚：乙酸乙酯作洗脱液，调节洗脱液的极性，其中，石油醚与乙酸乙酯体积比从10:1到1:1。

6.根据权要求4所述的半乳糖苷酶响应的叶绿素脂质体纳米光声探针的制备方法，其特征在于，步骤(2)中二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、胆固醇(Chol)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺聚乙二醇2000(DSPE-PEG 2000)和PPA-galactose(以焦脱镁叶绿酸-a质量计算)摩尔比为60：33：5：2。

7.根据权利要求4所述的一种半乳糖苷酶响应的叶绿素脂质体纳米光声探针的制备方法，其特征在于，步骤(2)中PBS的pH值为7.0～7.4，水化的温度为65℃。

8.一种根据权利要求1-7中任一所述的叶绿素脂质体纳米光声探针在动脉粥样硬化斑块的光声成像和斑块进展动态监测中的应用。