[发明专利]一种衰老SH-SY5Y细胞氧糖剥夺再灌注模型及其构建方法和应用

说明书

本发明公开了一种衰老SH‑SY5Y细胞氧糖剥夺再灌注模型及其构建方法和应用，涉及生物医药技术领域。该构建方法包括以下步骤：(1)利用D‑半乳糖使SH‑SY5Y细胞致衰老，构建得到衰老SH‑SY5Y细胞；(2)所述衰老SH‑SY5Y细胞先经过缺糖缺氧处理，再经复氧处理，得到所述衰老SH‑SY5Y细胞氧糖剥夺再灌注模型。本发明成功构建了SH‑SY5Y细胞氧糖剥夺再灌注模型，该模型可以模拟老龄脑缺血缺氧损伤过程的病理生理过程，为后续研究药物的神经保护作用奠定了基础。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，特别是涉及一种衰老SH-SY5Y细胞氧糖剥夺再灌注模型及其构建方法和应用。

背景技术

氧糖剥夺/再复氧(Oxygen glucose deprivation/reoxygenation，OGD/R)损伤的人神经母瘤细胞(SH-SY5Y)模型可以模拟体内的脑缺血再灌注期间损伤病理过程，己成为离体水平研究脑缺血损伤机制及药物作用的重要手段。通过控制OGD暴露的持续时间，可以观察不同时间节点的病理状况；运用各种分子生物学技术，可以靶向地分析某一功能分子与药物作用的关系。

现有研究表明脑缺血再灌注损伤具有增龄性差异，那么，在细胞水平上研究药物的神经保护作用就不宜用一般的SH-SY5Y细胞OGD/R模型。因此亟需建立一个衰老SH-SY5Y细胞氧糖剥夺再灌注模型，以模拟老龄脑缺血缺氧损伤过程的病理生理过程。

D-半乳糖(D-galactose，D-gal)一种细胞衰老诱导剂。正常浓度的D-gal在体内肝脏转化为葡萄糖，而较高浓度的D-gal，可经半乳糖氧化酶催化，产生过氧化氢和醛糖，由此大量的ROS进而引起蛋白质和脂质过氧化，也可造成线粒体损伤和功能紊乱，引起能量代谢障碍，最终导致细胞衰老。

发明内容

本发明的目的是提供一种衰老SH-SY5Y细胞氧糖剥夺再灌注模型及其构建方法和应用，以解决上述现有技术存在的问题，本发明成功构建了一个衰老细胞OGD/R模型，该模型可以模拟老龄脑缺血缺氧损伤过程的病理生理过程，为后续研究药物的神经保护作用奠定了基础。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种衰老SH-SY5Y细胞氧糖剥夺再灌注模型的构建方法，包括以下步骤：

(1)利用D-半乳糖使SH-SY5Y细胞致衰老，构建得到衰老SH-SY5Y细胞；

(2)所述衰老SH-SY5Y细胞先经过缺糖缺氧处理，再经复氧处理，得到所述衰老SH-SY5Y细胞氧糖剥夺再灌注模型。

进一步地，在步骤(1)中，所述D-半乳糖的使用浓度为100mM。

进一步地，所述D-半乳糖的致衰老时间为48h。

进一步地，在步骤(2)中，所述缺糖缺氧处理具体为：将步骤(1)得到的衰老SH-SY5Y细胞置于无糖DMEM培养液中，通入99.9％高纯度氮气后密封培养。

进一步地，通入99.9％高纯度氮气时，流速为1L/min，通入时间为5min。

进一步地，所述密封培养的时间为1h。

进一步地，在步骤(2)中，所述复氧处理的时间为24h。

本发明还提供一种根据上述的构建方法构建得到的衰老SH-SY5Y细胞氧糖剥夺再灌注模型。

本发明还提供上述的衰老SH-SY5Y细胞氧糖剥夺再灌注模型在筛选神经保护药物中的应用。

本发明公开了以下技术效果：