[发明专利]一种灵芝优质菌株HMGIM-M624的分子标记、特异性引物及鉴定方法

说明书

本发明涉及一种灵芝优质菌株HMGIM‑M624的分子标记、特异性引物及鉴定方法。所述灵芝优质菌株HMGIM‑M624于2019年11月7日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏编号为GDMCC No:60889；所述分子标记为InDel分子标记，灵芝优质菌株HMGIM‑M624在染色体sca34的第246451‑246460位的CATGCTGTA碱基缺失。本发明提供了检测灵芝优质菌株HMGIM‑M624分子标记的试剂，所述试剂能够将灵芝优质菌株HMGIM‑M624与11株市场主栽的灵芝品种菌株进行区分，特异性鉴别灵芝优质菌株HMGIM‑M624。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种灵芝优质菌株HMGIM-M624的分子标记、特异性引物及鉴定方法。

背景技术

灵芝[Ganoderma lucidum(Curtis)P.Karst.]是伞菌纲[Agaricomycetes]、多孔菌科[Polyporaceae]、灵芝属[Ganoderma P.Karst.]真菌。自《神农本草经》记载以来，关于其民间传说和不断被证实的药用价值，灵芝在我国已有两千多年的记载和应用历史，是最重要的药用真菌之一。近些年来，特别是自2000年版《中华人民共和国药典》收录灵芝为法定中药材后，科研人员对其开展了广泛和深入的研究，灵芝的药理基础及作用得到更进一步的明确。目前已经确定灵芝子实体中含有9类300余种化合物，具有生理活性的成分有灵芝多糖、三萜类化合物、蛋白质、多肽、核苷类、呋喃类、甾醇、生物碱和氨基酸等，其中以灵芝多糖、三萜化合物为主要活性成分。灵芝具有调节免疫力、抗肿瘤、保护肝脏及心血管、降血压、镇静安眠、延缓衰老、降血糖、抗氧化等生理保健功能。鉴于灵芝具有的显著功效，规模化人工栽培得到广泛重视，并已形成一个重要的产业，目前其栽培及加工产业的年产值超过1000亿元。灵芝的栽培和生产的发展在很大程度上必须依赖菌种，它是灵芝生产的前提和关键，我国灵芝主产区(山东、浙江、吉林、安徽、福建、陕西等)栽培中使用的菌种，主要为韩芝系列品种(韩国引进种)和沪农1号品种(本土选育品种)。

灵芝优质菌株HMGIM-M624从野生品种筛选驯化而来，经试种发现其菌丝生物学特征和栽培农艺性状优异，在常规代料栽培条件下其子实体多糖合成和积累优胜于市场主流灵芝品种，且具有产孢量少、性状稳定遗传等特点，适合工厂化规模化生产，避免灵芝喷孢时期产生大量的孢子粉对环境和机器带来的影响，满足灵芝产业化发展需求。

随着工厂化生产的推广，对栽培菌种的要求越来越高，需要更为简便、快速、准确的菌株鉴定技术以保证生产。目前灵芝菌种的分子标记主要集中在应用拮抗实验RFLP、RAPD(Random amplified polymorphic DNA，随机扩增的多态性DNA)分析、SCAR(SequenceCharacterized Amplified Region，特定序列扩增)分析、SRAP(Sequence-relatedamplified polymorphism，相关序列扩增多态性)分析、SSR(Simple Sequence Repeats，简单重复序列)分析及同工酶分析技术方面。其中，RFLP需要放射性同位素的参与，技术较复杂；RAPD实验重复性较差，结果可靠性较低；基于PCR的简单重复序列(SSR)标记相对比较简单、便宜、重复性较好，但是有些扩增条带不清楚且存在技术上的缺陷，如假等位基因、无效等位基因，从而导致SSR标记在基因型分型和数据分析上容易产生错误。

因此十分有必要研究新的简单、准确、高效适用于灵芝优质菌株HMGIM-M624菌株特异性鉴定的方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有灵芝优质菌株HMGIM-M624菌株特异性鉴定方法的不足，提供一种灵芝优质菌株HMGIM-M624的分子标记、特异性引物及鉴定方法。