[发明专利]一种内切葡聚糖酶编辑基因及其编码酶的应用

说明书

本发明提供一种内切葡聚糖酶编辑基因及其编码酶的应用，属于基因技术领域。为了解决现有技术当中内切葡聚糖酶表达量低、热稳定性较差等问题。本发明提供一种内切葡聚糖酶，所述内切葡聚糖酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。提供内切葡聚糖酶的生产新途径，提高内切葡聚糖酶活力。

技术领域

本发明属于基因技术领域，具体涉及一种内切葡聚糖酶编辑基因及其编码酶的应用。

背景技术

为合理地利用生物质资源，提高农业废弃物资源的利用效率，利用丝状真菌产生的纤维素酶将生物质纤维素降解并转化为高附加值化学品和生物燃料，有效促进绿色农业的发展。纤维素酶主要为内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶的共同作用。内切葡聚糖酶作用于纤维素分子的无定形区域，通过随机切割分子间的β-1,4-糖苷键来释放寡糖，外切葡聚糖酶作用于纤维素长链的两端，由外向内水解β-1,4-糖苷键，以释放出纤维低聚糖、纤维二糖或葡萄糖。β-葡萄糖苷酶水解纤维二糖和纤维寡糖为葡萄糖。然而，丝状真菌因其纤维素酶系组成不合理，酶活力较低，并且丝状真菌在发酵过程中往往难以控制等原因制约了纤维素降解技术的发展。此外，不同的工业应用中对纤维素酶各组分比例要求不同，如纺织业需要高酶活性内切葡聚糖酶。因此，可利用酵母等作为宿主进行异源表达，明确内切葡聚糖酶的理化性质，提高酶比活力，降低生产成本，是提升纤维素酶高效利用的重要途径。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术当中内切葡聚糖酶表达量低、热稳定性较差等问题。

本发明提供一种内切葡聚糖酶，所述内切葡聚糖酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明提供一种编码内切葡聚糖酶的基因，编码内切葡聚糖酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明提供一种携带上述的基因的重组载体。

进一步地限定，重组载体的出发载体为pPIC9K。

本发明提供一种重组微生物细胞，所述重组微生物细胞携带上述的基因，或上述的重组载体的重组微生物细胞。

本发明提供所述重组微生物细胞为真核微生物细胞或原核微生物细胞。

本发明提供上述的内切葡聚糖酶、上述的编码基因、上述的重组载体、上述的重组微生物细胞在制备内切葡聚糖酶中的应用。

本发明提供一种生产内切葡聚糖酶的方法，所述方法是采用上述的重组微生物细胞发酵获得内切葡聚糖酶。

进一步地限定，微生物细胞为毕赤酵母细胞。

发酵利用的培养基为MGY培养基(g/L)(10％(v/v)甘油100mL，ddH₂O 800mL，10×YNB 100mL，500×B 2mL)和BMMY培养基(g/L)(酵母提取物10g，蛋白胨20g，KH₂PO₄ 11.8g，K₂HPO₄·3H₂O 5.03g，溶于895mL水)；发酵条件：30℃，250rpm培养至OD₆₀₀达2-6；2500×g离心8min，保留菌体沉淀，悬浮菌体后，转接至BMMY培养基中(BMMY)，30℃，250rpm培养7d，并补充甲醇浓度为0.5％-1％(v/v)，离心后取上清。

本发明提供上述的内切葡聚糖酶在提高内切葡聚糖酶对离子液体1-乙基-3甲基咪唑醋酸盐耐受性中的应用。

本发明提供上述的内切葡聚糖酶、上述的编码基因、上述的重组载体、上述的重组微生物细胞在降解纤维素中的应用。

本发明提供一种生产还原糖的方法，.所述方法是采用上述的内切葡聚糖酶，反应温度为60℃，pH值为5.0，反应30min。