[发明专利]NT-proBNP杂交瘤细胞株及单克隆抗体、试纸条及检测试剂盒

说明书

本发明提供一种NT‑proBNP杂交瘤细胞株及单克隆抗体、试纸条及检测试剂盒。本发明涉及生物标记物免疫检测技术领域，特别是涉及NT‑proBNP杂交瘤细胞株及单克隆抗体、试纸条及检测试剂盒。本发明提供的NT‑proBNP单克隆抗体杂交瘤细胞株的保藏编号为：CGMCC No.45158。本发明取得的技术效果为：此细胞株分泌的单克隆抗体，对NT‑ProBNP具有较好的检测灵敏度，可用于制备NT‑ProBNP的免疫检测试剂盒以及试纸条，用于心脑血管疾病的早期快速诊断。

技术领域

本发明属于生物标志物免疫检测技术领域，具体涉及NT-proBNP杂交瘤细胞株及单克隆抗体、试纸条及检测试剂盒。

背景技术

人氨基端B型利钠肽前体(N-terminal pro-brain natriuretic peptide,NT-proBNP)是心肌细胞在合成多肽类激素B型利钠肽(BNP)过程中产生的生物活性未知的由76个氨基酸组成的直链多肽片段。我国发布的《中国心力衰竭诊断和治疗指南2018》中推荐对心衰高危人群(A群)进行利钠肽BNP/NT-proBNP筛查及干预，截点值为NT-proBNP≥125pmol/L或BNP≥35pg/mL。

NT-proBNP作为检测心衰的特异性标志物，其检测方法主要有胶体金免疫层析、荧光免疫层析、上传换发光免疫层析、磁性纳米粒子免疫层析等即时检测技术(POCT)，以及酶联免疫吸附剂测定(ELISA)技术和基于各种传感器的其他生物检测技术。

POCT是一种极为高效、敏感、快速的检测方法，检测时对样本的前处理简单、步骤少、检测成本低而且操作简便，适用于个体现场快速检测，因此在疾病检测领域得到了广泛应用。而使用试纸条的前提是得到对NT-proBNP具有高特异性和高灵敏度的单克隆抗体，然而，目前常规方法获得的单克隆抗体通常难以满足POCT检测的要求。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了NT-proBNP杂交瘤细胞株及单克隆抗体、试纸条及检测试剂盒，该NT-proBNP单克隆抗体杂交瘤细胞株能够分泌的NT-proBNP单克隆抗体，具有特异性和灵敏度高、稳定性好、检测成本低、操作便捷等优点。

为了实现上述目的，本发明第一方面提供一株NT-proBNP单克隆抗体杂交瘤细胞株，已于2022年5月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏名称为单克隆细胞株2A7，保藏编号：CGMCC No.45158，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

本发明第二方面提供了一种NT-proBNP单克隆抗体，由前述的NT-proBNP单克隆抗体杂交瘤细胞株产生。

本发明第三方面提供了一种试纸条，含有前述的NT-proBNP单克隆抗体。

本发明第四方面提供了一种检测试剂盒，含有前述的NT-proBNP单克隆抗体杂交瘤细胞株，或前述的NT-proBNP单克隆抗体。

本发明第五方面提供了一种检测试剂盒，含有前述的试纸条。

本发明取得的有益效果是：本发明利用pET-21a(+)、pGEX-4T-2基因载体和BL21(DE3)蛋白表达菌株，采用IPTG诱导表达NT-proBNP的N端添加GST标签和C端添加HIS标签的基因重组全抗原，将GST标签的重组全抗原用于免疫抗原，HIS标签基因重组全抗原为检测抗原，以PEG为融合剂将免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合，利用HTS-ELISA方法筛选融合杂交瘤细胞，再经过多次亚克隆，最终得到一株单克隆抗体杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体对NT-proBNP具有较好的检测灵敏度(IC₅₀值为0.078ng/mL)，可用于制备NT-proBNP的免疫检测试剂盒以及胶体金试纸条，用于心脑血管疾病的早期快速诊断。

附图说明

图1是完全抗原NT-proBNP-GST的质粒图谱；