[发明专利]一种超临界CO2

说明书

本申请公开了化学分离提取技术领域的一种超临界CO2法结合色谱技术提取豆甾醇的方法，包括以下步骤：S1、金龙胆草萃取：取金龙胆草地上部分为原料，经风干、打粉后，将金龙胆草地上部分粉末装入超临界CO₂萃取装置，萃取得到金龙胆草地上部分的浸膏；S2、豆甾醇提取：将浸膏溶于一定量的溶剂内，溶剂的组成为二氯甲烷和甲醇，二氯甲烷和甲醇体积比为1：1，再经微孔滤膜滤过，湿法上样过LH‑20凝胶柱，再次用溶剂洗脱三个柱体积收集得到四个组分，TLC点板分析合并组分，旋蒸析出组分，反复重结晶得到豆甾醇。本申请提供的提取方法，具有工艺简单、分离方法可控性、重现性好、成本低、操作简单等特点。

技术领域

本发明涉及分离提取技术领域，具体涉及一种超临界CO2法结合色谱技术提取豆甾醇的方法。

背景技术

金龙胆草(Conyza blinii)为我国川滇黔地区的一种道地中药材，具有清热解毒、止咳平喘的功效，主要用于治疗慢性支气管炎引起的咳嗽及其他炎症。常用于治疗肺热咳嗽，痰多气喘，咽痛，口疮，湿热黄疸，衄血，便血，崩漏，外伤出血等症，临床应用有金龙胆草浸膏片等。文献报道金龙胆草的化学成分主要有萜类、皂苷、酚性物质、酸性物质、挥发油及生物碱等。

豆甾醇是植物甾醇的典型代表，广泛存在于各类植物及植物油精炼的脱臭馏出物中，具有多种生物学活性，无毒，具有乳化性、稳定性、抗氧化等特点，广泛应用于食品、医药等领域。

超临界流体萃取(Supercritical Fluid Extraction，SFE)技术是近年来发展起来的一项新型萃取和分离技术。由于CO₂的超临界温度低、无色、无毒、无味、不易燃烧、易制成高纯度气体、价格低廉，且具有较好的溶剂特性，因此CO₂是首选的超临界流体。超临界CO2流体萃取的天然产物具有较好的提取、分离效果，目前已被广泛应用于天然产物如植物油、香辛香料等天然有效成分的提取。

目前尚无将超临界流体萃取应用于提取金龙胆草中豆甾醇的报道，本申请提供的提取方法，具有工艺简单、分离方法可控性、重现性好、成本低、操作简单等特点。

发明内容

本发明意在提供一种超临界CO2法结合色谱技术提取豆甾醇的方法，以提供一种具有多重促生性能且能够促进高粱生长的菌株，以提高高粱质量和产量。

为了达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种超临界CO2法结合色谱技术提取豆甾醇的方法，包括以下步骤：

S1、金龙胆草萃取：取金龙胆草地上部分为原料，经风干、打粉后，将金龙胆草地上部分粉末装入超临界CO₂萃取装置，萃取压力为32～45MPa，温度40～50℃，时间3～5h， CO₂流量3～9L/h，第一次纯化分离压力为5～8MPa，分离温度为34～38℃；第二次纯化分离压力为12～17MPa，分离温度为48～52℃，萃取得到金龙胆草地上部分的浸膏；

S2、豆甾醇提取：将浸膏溶于一定量的溶剂内完全溶解，溶剂的组成为二氯甲烷和甲醇，二氯甲烷和甲醇体积比为1：1，再经微孔滤膜滤过，湿法上样过LH-20凝胶柱，再次用该溶剂洗脱三个柱体积收集得到四个组分，TLC点板分析合并组分，旋蒸析出组分，反复重结晶得到豆甾醇。

本发明的工作原理及有益效果：本发明首次采用超临界CO2法结合色谱技术从金龙胆草地上部分中提取到具有良好生物活性的豆甾醇，并且提供的提取方法，工艺简单，分离方法可控性和重现性好，成本低，操作简单。利用的光谱技术，主要包括核磁共振谱(1H-NMR、 13C-NMR)鉴定化合物的结构，该化合物为白色针状结晶，通过核磁技术，确定该化合物为豆甾醇。