[发明专利]一种提高精液保存质量的常温保存稀释液及其制备和应用

说明书

本发明公开了一种提高精液保存质量的常温保存稀释液及其制备和应用，所述稀释液包括基础稀释液以及添加在该基础稀释液中的阿魏酸，其中阿魏酸的浓度为25～100μmol/L，基础稀释液的组成为：以超纯水为溶剂，含有200～300mmol/L Tris、50～150mmol/L果糖、50～100mmol/L柠檬酸钠、5万IU/100mL青霉素和5万IU/100mL链霉素。本发明提供的稀释液可显著提高精液常温保存过程中精液质量，延长保存时间，有效解决了鲜精输精的时效性问题。

技术领域

本发明属于动物繁殖技术领域，具体涉及一种提高精液保存质量的常温保存稀释液及其制备和应用。

背景技术

精液保存与人工授精技术相结合，在现代畜牧业生产中发挥着重要作用。精液保存分为常温、低温和冷冻保存三种方法，其中常温保存指在将精液稀释后保存在15～25℃条件下，常温保存具有操作简单、保存效果好、保存条件要求低和便于运输和人工授精效果好的优点。但是常温下保存，一方面微生物生长会迅速影响精液质量，另一方面精子活力下降较快，保存时间通常只有1～3天。

研究表明，在精液的常温保存过程中，由于精子质膜中存在大量的不饱和脂肪酸，容易受氧化应激影响而产生过量的ROS(Reactive Oxygen Species，活性氧)，导致精液中的氧化和抗氧化平衡体系遭到破坏。精子产生ROS是氧化代谢的正常结果，低浓度的ROS对于精子的功能具有重要作用，如精子的或能、顶体反应、精卵结合及相关信号通路等。高浓度的ROS通过脂质过氧化作用使精子活力和质膜完整性降低，DNA断裂增加，导致细胞凋亡，降低精液保存质量。

精液中存在的抗氧化防御平衡体系包括SOD、CAT、GPx、GR以及非酶抗氧化剂如蛋氨酸、抗坏血酸和α-生育酚等。当精液进行体外保存时，由于产生ROS等原因，这种平衡很容易被打破，因此向精液中添加抗氧化剂或者其他物质充当保护剂很有必要。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种常温保存稀释液，该稀释液能有效提高精液保存质量，延长常温下的保存时间。

为了实现上述目的，本发明的技术方案具体如下：

一种提高精液保存质量的常温保存稀释液，包括基础稀释液以及添加在该基础稀释液中的阿魏酸，其中阿魏酸的浓度为25～100μmol/L，基础稀释液的组成优选为：以超纯水为溶剂，含有200～300mmol/L Tris、50～150mmol/L果糖、50～100mmol/L柠檬酸钠、5万IU/100mL青霉素和5万IU/100mL链霉素。

在上述技术方案中，基础稀释液的最佳组成为：以超纯水为溶剂，含有Tris250mmol/L、果糖100mmol/L、柠檬酸钠75mmol/L、青霉素5万IU/100mL、链霉素5万IU/100mL。

在上述技术方案中，阿魏酸的最佳浓度为50μmol/L。

上述常温保存稀释液的制备方法具体为：按配方称取含有Tris、果糖、柠檬酸钠、青霉素、链霉素和阿魏酸溶于超纯水中，混匀即得。

本发明还提供了上述常温保存稀释液在精液保存中的应用方法，具体为：将常温保存稀释液与新鲜精液分别预热后，用常温保存稀释液对精液进行稀释，将稀释之后的精液置于15～20℃下恒温保存。

进一步地，在上述技术方案中，稀释液和精液的预热温度均为33～38℃。

进一步地，在上述技术方案中，用常温保存稀释液稀释精液时，采用分布稀释的方法，稀释倍数可以为8～10倍。

进一步地，在上述技术方案中，精液来自于湖北黑头羊。