[发明专利]一种K252c衍生物的生物合成方法及其应用

权利要求书

1.一种K252c衍生物的生物合成方法，其特征在于，所述K252c衍生物的结构为

所述R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇和R₈各自独立地选自H、CH₃、OH、OCH₃、F、Cl、Br、NH₂、CN或NO₂中的任意一种，且其中至少一种不为H；

所述生物合成方法包括：将重组质粒转入大肠杆菌，得到重组大肠杆菌，活化后，将菌株、培养基、诱导剂与原料化合物混合，诱导培养，得发酵液，萃取，即得所述K252c衍生物；

所述重组质粒携带编码L-色氨酸氧化酶VioA、CPA合成酶VioB、单加氧酶RebP和单加氧酶SpcC的核苷酸序列；

所述原料化合物的结构为

所述R₉、R₁₀、R₁₁和R₁₂各自独立地选自H、CH₃、OH、OCH₃、F、Cl、Br、NH₂、CN或NO₂中的任意一种，且其中至少一种不为H。

2.如权利要求1所述的K252c衍生物的生物合成方法，其特征在于，所述K252c衍生物选自4F-K252c-1、4F-K252c-2或4,4’F-K252c中的任意一种，分别依次对应如下结构：

所述原料化合物的结构为

3.如权利要求1或2所述的K252c衍生物的生物合成方法，其特征在于，所述重组质粒包括pETDuet系列、pACYCDuet系列、pRSFDuet系列、pCOLADuet或pCDFDuet系列表达载体中的任意一种；

优选地，所述重组质粒包括pCDFDuet-1_vioAvioBrebPspcC；

优选地，所述大肠杆菌包括大肠杆菌BL21(DE3)。

4.如权利要求1-3中任一项所述的K252c衍生物的生物合成方法，其特征在于，所述培养基包括M9培养基；

优选地，所述诱导剂包括IPTG；

优选地，所述IPTG的加入量为0.3-0.5mM；

优选地，所述原料化合物的加入量为3-5mM。

5.如权利要求1-4中任一项所述的K252c衍生物的生物合成方法，其特征在于，所述诱导培养的温度为15-25℃，所述诱导培养的时间为36-48h。

6.如权利要求1-5中任一项所述的K252c衍生物的生物合成方法，其特征在于，所述活化包括：将重组大肠杆菌接种至LB培养基中进行活化培养；

优选地，所述活化培养的温度为33-40℃。

7.如权利要求1-6中任一项所述的K252c衍生物的生物合成方法，其特征在于，所述萃取中使用的萃取试剂包括乙酸乙酯；

优选地，所述萃取在15-40℃下进行；

优选地，所述萃取前还包括对发酵液进行加热，所述加热的温度为80-90℃，所述加热的时间为10-20min。

8.如权利要求1-7中任一项所述的K252c衍生物的生物合成方法或由所述生物合成方法合成的K252c衍生物在制备抗癌药物中的应用。

9.如权利要求1-7中任一项所述的K252c衍生物的生物合成方法或由所述生物合成方法合成的K252c衍生物在制备激酶抑制剂中的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述激酶抑制剂包括ALK5抑制剂、FLT3ITD抑制剂、PIM1抑制剂或PIM3抑制剂中的任意一种或至少两种的组合；

优选地，当所述K252c衍生物为4,4’F-K252c时，所述激酶抑制剂为FLT3ITD抑制剂、PIM1抑制剂或PIM3抑制剂中的任意一种或至少两种的组合；

优选地，当所述K252c衍生物为4F-K252c-1，所述激酶抑制剂为FLT3ITD抑制剂和/或PIM1抑制剂；

优选地，当所述K252c衍生物为4F-K252c-2时，所述激酶抑制剂为ALK5抑制剂、FLT3ITD抑制剂或PIM1抑制剂中的任意一种或至少两种的组合。