[发明专利]用于检测植物种传病毒CMV的引物组及其应用

权利要求书

1.用于检测植物种传病毒CMV的引物组，其特征在于，所述引物组包括引物PS-CMVCP和引物PS-CMV3a；所述引物PS-CMVCP的正向引物如SEQ ID No.1所示，反向引物如SEQ IDNo.2所示；所述引物PS-CMV3a的正向引物如SEQ ID No.3所示，反向引物如SEQ ID No.4所示。

2.权利要求1所述的引物组在筛选未携带种传病毒CMV的植物种子中的应用。

3.权利要求1所述的引物组在用于制备检测植物种传病毒CMV的试剂、试剂盒中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述引物PS-CMVCP对种传病毒CMV的最低检测浓度为10^-5倍；所述引物PS-CMV3a对种传病毒CMV的最低检测浓度为10^-4倍。

5.一种植物种传病毒CMV的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取待检测植物种子的总RNA并合成cDNA；

(2)以cDNA为模板，利用权利要求1所述的引物组进行PCR扩增，对PCR产物进行电泳检测；若检测到引物扩增条带，则待检测植物种子携带种传病毒CMV，若未检测到引物扩增条带，则待检测植物种子不携带种传病毒CMV。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中，利用高强度低电渗1.5％琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行检测，若同时检测到引物PS-CMVCP和PS-CMV3a的扩增条带，则待检测植物种子携带种传病毒CMV；若仅检测到引物PS-CMVCP的扩增条带，未检测到引物PS-CMV3a的扩增条带，则待检测植物种子携带微量种传病毒CMV；若均未检测到引物PS-CMVCP和PS-CMV3a的扩增条带，则待检测植物种子不携带种传病毒CMV。

7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述引物PS-CMVCP的扩增条件为：95℃预变性3min；95℃变性15s，58.5℃退火30s，72℃延伸60s，35个循环；72℃延伸5min；所述引物PS-CMV3a的扩增条件为：95℃预变性3min；95℃变性15s，60℃退火30s，72℃延伸60s，35个循环；72℃延伸5min。

8.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述扩增体系包括：cDNA模板2μl，正反引物各1μl，2×Go Taq R Colorless Master Mix 12.5μl，ddH₂O 8.5μl。

9.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述植物包括黄瓜、辣椒、西瓜、甜瓜、南瓜、烟草。

10.权利要求1所述的引物组在用于判别植物种子侵染种传病毒CMV的侵染力及侵染量中的应用。