[发明专利]用于检测大丽轮枝菌的引物组合、试剂盒及应用

权利要求书

1.用于检测大丽轮枝菌的引物组合，其特征在于，所述引物组合包括RPA引物对和crRNA；所述RPA引物对的靶标基因包括大丽轮枝菌ITS基因；所述crRNA的靶标基因包括大丽轮枝菌ITS基因。

2.根据权利要求1所述的引物组合，其特征在于，所述RPA引物对包括上游引物和下游引物；所述上游引物的序列包括Seq_1、Seq_2、Seq_3和Seq_4中的一种；所述下游引物的序列包括Seq_5、Seq_6、Seq_7和Seq_8中的一种。

3.根据权利要求2所述的引物组合，其特征在于，所述上游引物的序列包括Seq_1；所述下游引物的序列包括Seq_6。

4.根据权利要求1所述的引物组合，其特征在于，所述crRNA包括框架核酸片段序列和向导序列；所述向导序列包括Seq_14、Seq_15和Seq_16中的一种。

5.根据权利要求4所述的引物组合，其特征在于，所述框架核酸片段序列包括Seq_13；所述向导序列包括Seq_15。

6.根据权利要求1-5任意一项所述的引物组合，其特征在于，所述RPA引物对包括Seq_1和Seq_6；所述crRNA包括框架核酸片段序列Seq_13和向导序列Seq_15。

7.用于检测大丽轮枝菌的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-6任意一项所述引物组合，还包括DEPC水、LwaCas13a缓冲液、LwaCas13a蛋白、NTP buffer mix、T7 RNApolymerase mix、RNase inhibitor、RNA Reporter和大丽轮枝菌质粒标准品。

8.权利要求1-6任意一项所述引物组合或者权利要求7所述试剂盒在检测大丽轮枝菌中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：

S1、提取待测样本基因组DNA，以所述待测样本基因组DNA为模板，进行RPA扩增，得到RPA产物；

S2、以所述RPA产物为模板，构建大丽轮枝菌CRISPR/Cas13检测体系。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，步骤S2所述CRISPR/Cas13检测体系为：DEPC水8.4μl、LwaCas13a缓冲液2μl、LwaCas13a蛋白1μl、crRNA 2μl、NTP buffer mix 1μl、T7 RNA polymerase mix 0.6μl、RNase inhibitor 0.5μl、RNA Reporter 2.5μl和大丽轮枝菌RPA产物2μl。