[发明专利]一种穿梭载体及其构建方法和应用在审
| 申请号： | 202211207197.7 | 申请日： | 2022-09-30 |
| 公开（公告）号： | CN115992160A | 公开（公告）日： | 2023-04-21 |
| 发明（设计）人： | 陈钰;王钧莹;康康;胡皓夫 | 申请（专利权）人： | 倍生生物科技（深圳）有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/65 |
| 代理公司： | 深圳智趣知识产权代理事务所(普通合伙) 44486 | 代理人： | 崔艳峥 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市光明*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 穿梭 载体 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一种穿梭载体，其特征在于，所述穿梭载体包括大肠杆菌的质粒复制子和大肠杆菌抗性筛选基因；所述大肠杆菌的质粒复制子为R6K，所述大肠杆菌抗性筛选基因为rpsL基因或pheS基因；所述穿梭载体中不含温敏型复制子和sacB基因。
2.根据权利要求1所述的穿梭载体，其特征在于，所述穿梭载体上含有如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列。
3.根据权利要求1所述的穿梭载体，其特征在于，所述穿梭载体上含有如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列。
4.一种重组微生物细胞，其特征在于，所述重组微生物细胞含有权利要求1～3任一项所述的穿梭载体。
5.一种如权利要求1～3任一项所述的穿梭载体的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
使用环状聚合酶延伸克隆的方法将所述大肠杆菌的质粒复制子和所述大肠杆菌抗性筛选基因进行拼接后，通过电转化或化学转化的方法转化到大肠杆菌中。
6.根据权利要求5所述的穿梭载体的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
使用环状聚合酶延伸克隆将引物对1～4的PCR产物进行拼接后，转化到大肠杆菌中；
7.根据权利要求5所述的穿梭载体的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
使用环状聚合酶延伸克隆将引物对1～2和5的PCR产物进行拼接后，转化到大肠杆菌中；
8.权利要求1～3任一项所述的穿梭载体或权利要求4所述的重组微生物细胞在大肠杆菌基因组改造中的应用。
9.权利要求1～3任一项所述的穿梭载体或权利要求4所述的重组微生物细胞在大肠杆菌基因组外的遗传物质上引入特定点突变中的应用。
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