[发明专利]一种绵羊DQB基因的1号外显子的扩增引物对、sg序列和应用

权利要求书

1.一种绵羊DQB基因的1号外显子的扩增引物对，其特征在于，包括DQBF1和DQBR1，其中DQBF1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，DQBR1的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.利用权利要求1所述扩增引物对扩增绵羊DQB基因的1号外显子的方法，其特征在于，包括以下步骤，以绵羊基因组DNA为模板，与权利要求1所述扩增引物对配制PCR扩增体系，进行PCR扩增，得到所述绵羊DQB基因的1号外显子；

所述PCR扩增的程序，包括：95℃预变性5min；95℃变性30s，59.5℃退火30s，72℃延伸45s，34循环；72℃再延伸5min。

3.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述PCR扩增体系以25μL计，包括DQBF11μL、DQBR11μL、DNA模板1μL、2×Mix 12.5μL和余量的H₂O。

4.以权利要求2或3所述方法扩增得到的绵羊DQB基因的1号外显子为靶基因设计的sg序列。

5.根据权利要求5所述sg序列，其特征在于，所述sg序列包括两对单链寡核苷酸序列：DQBsg1-F和DQBsg1-R，及DQBsg2-F和DQBsg2-R；

其中DQBsg1-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，DQBsg1-R的核苷酸序列如SEQ IDNO.4所示，DQBsg2-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，DQBsg2-R的核苷酸序列如SEQ IDNO.6所示。

6.一种包含权利要求4或5所述sg序列的重组载体。

7.权利要求6所述重组载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：将sg序列的两对单链寡核苷酸序列分别退火，然后连接到线性化的基础载体上，得所述重组载体。

8.根据权利要求7所述构建方法，其特征在于，所述退火的程序包括95℃预变性5min，37℃退火10min。

9.权利要求4或5所述sg序列或权利要求6所述重组载体在对绵羊基因组中DQB基因1号外显子区进行基因编辑中的应用。

10.一种对绵羊基因组中DQB基因1号外显子区进行基因编辑的体系，其特征在于，包括权利要求6所述重组载体和绵羊体细胞。