[发明专利]具有经工程改造的免疫球蛋白λ轻链的非人动物以及所述非人动物的用途

权利要求书

1.一种经遗传修饰的啮齿动物，所述啮齿动物的种系基因组包含：

第一经工程改造的内源性免疫球蛋白κ轻链基因座，所述第一经工程改造的内源性免疫球蛋白κ轻链基因座包含：

(a)一个或多个人Vλ基因区段，

(b)一个或多个人Jλ基因区段，以及

(c)Cλ基因，

其中所述一个或多个人Vλ基因区段和所述一个或多个人Jλ基因区段可操作地连接至所述Cλ基因；并且

其中所述啮齿动物在所述第一经工程改造的内源性免疫球蛋白κ轻链基因座处缺乏啮齿动物Cκ基因。

2.一种在经遗传修饰的啮齿动物中产生抗体的方法，所述方法包括以下步骤:

(a)用目标抗原对啮齿动物进行免疫，

其中所述啮齿动物具有种系基因组，所述种系基因组包含：

第一经工程改造的内源性免疫球蛋白κ轻链基因座，所述第一经工程改造的内源性免疫球蛋白κ轻链基因座包含：

(i)一个或多个人Vλ基因区段，

(ii)一个或多个人Jλ基因区段，以及

(iii)Cλ基因，

其中所述一个或多个人Vλ基因区段和所述一个或多个人Jλ基因区段可操作地连接至所述Cλ基因，并且

其中所述Cλ基因(c)代替所述第一经工程改造的内源性免疫球蛋白κ轻链基因座处的啮齿动物Cκ基因；

(b)将所述啮齿动物维持在足以使所述啮齿动物对所述目标抗原产生免疫应答的条件下；以及

(c)从所述啮齿动物中回收：

(i)结合所述目标抗原的抗体，

(ii)核苷酸，所述核苷酸编码结合所述目标抗原的抗体的人轻链或重链可变结构域、轻链或重链，或

(iii)表达结合所述目标抗原的抗体的细胞。

3.一种制备抗体的方法，所述方法包括：

(a)在宿主细胞中表达编码免疫球蛋白重链的第一核苷酸序列，其中所述第一核苷酸序列包含人重链可变区序列；

(b)在宿主细胞中表达编码免疫球蛋白λ轻链的第二核苷酸序列，其中所述第二核苷酸序列包含人λ轻链可变区序列，所述人λ轻链可变区序列从经遗传修饰的啮齿动物中鉴定出，所述经遗传修饰的啮齿动物的种系基因组包含：

第一经工程改造的内源性免疫球蛋白κ轻链基因座，所述第一经工程改造的内源性免疫球蛋白κ轻链基因座包含：

(i)一个或多个人Vλ基因区段，

(ii)一个或多个人Jλ基因区段，以及

(iii)Cλ基因，

其中所述一个或多个人Vλ基因区段和所述一个或多个人Jλ片段可操作地连接至所述Cλ基因，并且

其中所述啮齿动物在所述经工程改造的内源性免疫球蛋白κ轻链基因座处缺乏啮齿动物Cκ基因；

(c)培养所述宿主细胞，以使得表达免疫球蛋白轻链和免疫球蛋白重链并形成抗体；以及

(d)从所述宿主细胞或宿主细胞培养物中获得所述抗体。

4.一种啮齿动物胚胎干(ES)细胞，所述啮齿动物胚胎干细胞的基因组包含：

第一经工程改造的内源性免疫球蛋白κ轻链基因座，所述第一经工程改造的内源性免疫球蛋白κ轻链基因座包含：

(a)一个或多个人Vλ基因区段，

(b)一个或多个人Jλ基因区段，以及

(c)Cλ基因，

其中所述一个或多个人Vλ基因区段和所述一个或多个人Jλ基因区段可操作地连接至所述Cλ基因，并且

其中所述啮齿动物ES细胞在所述第一经工程改造的内源性免疫球蛋白κ轻链基因座处缺乏啮齿动物Cκ基因。

5.一种用于产生人重链或λ轻链可变结构域序列的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)对如权利要求1-60中任一项所述的啮齿动物进行免疫；以及

(b)确定抗体的人重链或λ轻链可变结构域序列，所述抗体特异性地结合所述抗原并且由经遗传修饰的小鼠产生。

6.一种用于产生人重链或λ轻链可变区序列的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)对如权利要求1-60中任一项所述的啮齿动物进行免疫；以及

(b)确定人重链或λ轻链可变区序列，所述人重链或λ轻链可变区序列分别编码抗体的人重链或λ轻链可变结构域，所述抗体特异性地结合所述抗原并且由经遗传修饰的小鼠产生。