[发明专利]生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株、制备方法和应用

说明书

本公开提供了一种生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株、制备方法和应用，该菌株共同表达了鲎凝血因子FGβ＇和分子伴侣素CpkA；所述鲎凝血因子FGβ＇是对获取到的鲎凝血因子FGβ删除如SEQ ID NO:1所示的前导肽，并添加如SEQ ID NO:2所示带净正电荷的锚定肽获取到的。在本公开提供的技术方案中CpkA的羧基端带负电，而FGβ＇相应地带有一段带正电的锚定肽。通过静电相互作用，CpkA和FGβ＇结合力增强，因此CpkA可以更有效地帮助FGβ＇折叠成正确的构象，从而提高其可溶性表达。

技术领域

本公开涉及生物技术领域，且更具体地，涉及一种生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株、制备方法和应用。

背景技术

FG是一种具有独特结构的异源二聚体丝氨酸蛋白酶酶原，FG是由两个非共价结合的亚基α和β组成，当(1,3)-β-D-葡聚糖存在的情况下，两个亚基被激活成为活性因子，FG被激活，启动鲎血细胞裂解物的凝血机制，因此鲎凝血因子FGβ在(1,3)-β-D-葡聚糖的检测中具有重要意义，然而，目前鲎凝血因子FGβ在原核表达时，可溶性较差。

发明内容

本公开提供了一种生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株、制备方法和应用，以解决现有技术中FGβ在原核表达时，可溶性较差的技术问题。

根据本公开的第一方面，提供了一种生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株，所述菌株共同表达了鲎凝血因子FGβ＇和分子伴侣素CpkA；

所述鲎凝血因子FGβ＇是对获取到的鲎凝血因子FGβ删除如SEQ ID NO:1所示的前导肽，并添加如SEQ ID NO:2所示带净正电荷的锚定肽获取到的。

可选地，所述菌株包含第一重组表达载体和第二重组表达载体；

所述第一重组表达载体包含所述鲎凝血因子FGβ＇；

所述第二重组表达载体包含所述分子伴侣素CpkA。

可选地，所述菌株为大肠杆菌工程菌。

可选地，所述第一重组表达载体为第一大肠杆菌表达质粒。

可选地，所述第二重组表达载体为第二大肠杆菌表达质粒。

可选地，所述菌株为Escherichia Coli BL21。

可选地，所述第一重组表达载体为pET17b。

可选地，所述第二重组表达载体为pACYC。

根据本公开的第二方面，提供了一种如上述的生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株的制备方法，包括以下步骤：

将所述鲎凝血因子FGβ＇连接到第一表达载体中，得到第一重组表达载体；其中所述鲎凝血因子FGβ＇是对获取到的鲎凝血因子FGβ删除如SEQ ID NO:1所示的前导肽，并添加如SEQ ID NO:2所示带净正电荷的锚定肽获取到的；

将分子伴侣素CpkA连接到第二表达载体中，得到第二重组表达载体；

将所述第一重组表达载体和所述第二重组表达载体共转化到工程菌中，得到生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株。

根据本公开的第三方面，提供了一种鲎凝血因子FGβ＇的制备方法，对上述的菌株加入IPTG同时诱导表达FGβ＇和CpkA两种蛋白，然后进行蛋白纯化，得到目的蛋白FGβ＇。

根据本公开的第四方面，提供了一种鲎凝血因子FGβ＇，所述鲎凝血因子FGβ＇是对获取到的鲎凝血因子FGβ删除如SEQ ID NO:1所示的前导肽，并添加如SEQ ID NO:2所示带净正电荷的锚定肽获取到的。

根据本公开的第五方面，提供了一种如上述的鲎凝血因子FGβ＇在制备(1,3)-β-D-葡聚糖含量检测试剂或真菌感染检测试剂中的应用。