[发明专利]樱桃番茄根际土壤微生物中活性次级代谢产物及其制备与应用

权利要求书

1.一种抗菌、细胞毒活性粗提物，其特征在于所述粗提物由如下方法制备：

(1)将Bacillus sp.HNU24接入LB发酵培养基中，28～30℃静置培养7天得发酵物；

(2)步骤(1)得到的发酵物用等体积的乙酸乙酯萃取2～4次，合并萃取液后减压浓缩即得粗提物。

2.一种由Bacillus sp.HNU24同时制备化合物1-8的方法，其特征在于包括如下步骤：

将权利要求1步骤(2)得到的粗提物经过减压硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯作为洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱梯度分别为90:10、80:20、70:30、60:40、50:50、40:60、30:70、20:80、10:90、0:100，每个梯度收集两个柱体积，依次得到10个组分A-J，其中梯度80:20洗脱得到的为组分B，梯度70:30洗脱得到的为组分C；

组分B浓缩后，采用正相硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯作为洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱梯度分别为：9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、7:3，每个梯度收集两个柱体积，根据极性大小分成7个组分，其中梯度9:1洗脱得到的为组分1，梯度8:1洗脱得到的为组分2，梯度7:1洗脱得到的为组分3，梯度6:1洗脱得到的为组分4，梯度5:1洗脱得到的为组分5，梯度4:1洗脱得到的为组分6，梯度3:1和7:3洗脱得到的为组分7；其中组分2经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为Waters C18，9.4×250 mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH:H₂O＝65:35，得到化合物1、2；组分4经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为Waters C18，9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH:H₂O＝60:40，得到化合物3和4；

组分C浓缩后，经Sephadex LH-20凝胶柱层析，洗脱剂为CHCl₃：MeOH＝1:1，再经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为Waters C18，9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH:H₂O＝70:30，得到化合物5、6、7、8；

所述化合物1-8结构如下：

3.Bacillus sp.HNU24在制备抗菌、细胞毒活性粗提物中的应用。

4.Bacillus sp.HNU24在同时制备化合物1-8中的应用。

5.权利要求1所述的粗提物、权利要求2制备的化合物1-8或其药学上可接受的盐在制备抗菌药物和/抗肿瘤药物中的应用。

6.一种药物组合物，其特征在于该药物组合物以权利要求1所述的粗提物、权利要求2制备的化合物1-8或其药学上可接受的盐作为有效成分。

7.权利要求6所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物还可包括其他抗菌剂或抗肿瘤化合物。该药物组合物还可包括药学上可接的辅料。该药物组合物的剂型优选固体制剂或液体制剂等。

8.权利要求1-4任一项所述的Bacillus sp.HNU24，其特征在于其菌种保藏信息如下：保藏单位名称：广东省微生物菌种保藏中心；保藏单位地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，广东省科学院微生物研究所；保藏日期：2020年10月15日；保藏编号：GDMCCNo.61231；分类命名：Bacillus sp.。