[发明专利]一种RNA样本保存液及其应用

说明书

本发明公开了一种RNA类样本保存液，包括：核酸稳定剂、螯合剂、还原剂和pH缓冲剂，所述核酸稳定剂包括离液盐和/或表面活性剂；所述保存液的pH为5.0～9.0；所述核酸稳定剂的浓度为0.1M～3M、所述螯合剂的浓度为1mM～50mM、所述还原剂的浓度为5mM～30mM、所述pH缓冲剂的浓度为30mM～50mM。本发明为一种可直接使用的样品保存稀释液，其原理是抑制RNase活性，可有效保护新鲜样本里的RNA免受降解，具有稳定、易保存、便捷等优点。适用于血清、血浆、组织、尿液、分泌物等RNA类样本的保存和稀释。

技术领域

本发明涉及生物制品技术领域，属于聚合酶链式反应(PCR)技术领域核糖核酸类样本的稀释和保存范畴，具体涉及RNA类样本保存液及其应用。

背景技术

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，具有特异性、敏感性、产率高、快速简便、重复性好等优点。PCR直接检测目的基因的样本分为DNA类样本或RNA类样本，但是对样本的稀释和保存要求甚高。

核糖核酸(Ribonucleid acid,RNA)作为生命遗传信息的载体之一，存在于生物细胞以及部分病毒、类病毒中，并参与多种生命活动，存在于的遗传信息载体。RNA由核糖核苷酸经磷酯键缩合而成长链状分子。一个核糖核苷酸分子由磷酸，核糖和碱基构成。RNA的碱基主要有4种，即A腺嘌呤，G鸟嘌呤，C胞嘧啶，U尿嘧啶。其中，U(尿嘧啶)取代了DNA中的T胸腺嘧啶而成为RNA的特征碱基。在科研及临床检测的分子生物学领域，RNA被广泛研究及应用，高质量、完整的RNA可用于各种分子生物学实验和检测，如核酸酶保护实验、原癌基因表达检测、用药监测等。RNA本身的单链结构既不稳定，且极易被广泛存在并极其稳定的核糖核酸酶(RNase)降解，RNA酶是一类生物活性非常稳定的酶，除细胞内RNA酶外，环境中的灰尘、各种实验器皿和试剂、人类皮肤的汗液、唾液中均存在RNA酶，且RNA酶耐热、耐酸碱，煮沸也不能使之完全失活，蛋白变性剂可使之暂时失活，但变性剂去除后，又可恢复活性。所以在RNA提取过程中必须避免外源性RNA酶的污染和抑制内源性RNA酶的活性。RNA易受外界物理因素：温度、湿度；化学因素：pH值、水解反应、氧化反应；生物因素：酶解及微生物侵染等作用等因素而降解。另外，离体血液细胞的基因转录水平可能会迅速发生改变，而RNA的完整性和基因转录水平的稳定性会对检测结果的可靠性和准确性产生重要影响。

目前现有的RNA样本保存液及其缺点主要有：①稀释液用DEPC水、RNAsin等，保存于液氮或低温保存，室温保存时间过短；②市售血液RNA采血管对全血RNA有一定的保存效果，但缓冲液或稀释液不适用于其他类型的RNA样本(组织、尿液、分泌物、培养液等)，且血液中RNase活性丰富，采集样品后需立即提取RNA或者对样品的储存温度和时间都有较严格的要求，因而限制了全血RNA检测的应用，且EDTA抗凝血无法保证离体血液细胞基因转录水平的稳定性，严重影响检测结果的准确性。因此，开发一种高效防止RNA降解且能适用不同RNA类样本的保存稀释液，具有重要的意义。

发明内容

针对上述技术背景中的问题，本发明的一个目的在于提供一种RNA类样本保存液，可作为临床不同类型的RNA类样本(血清、血浆、组织、尿液、分泌物、培养液等)的样本稀释或保存。

为了实现以上目的，本发明采用的技术方案为：

一种RNA类样本保存液，包括：核酸稳定剂、螯合剂、还原剂和pH缓冲剂，所述核酸稳定剂包括离液盐和/或表面活性剂；所述保存液的pH为5.0～9.0；

所述核酸稳定剂的浓度为0.1M～3M、所述螯合剂的浓度为1mM～50mM、所述还原剂的浓度为5mM～30mM、所述pH缓冲剂的浓度为30mM～50mM。

进一步地，所述核酸稳定剂的浓度为0.1M～1M、所述螯合剂的浓度为20mM～40mM、所述还原剂的浓度为5mM～15mM、所述pH缓冲剂的浓度为35mM～45mM。