[发明专利]一种宽宿主谱变栖克雷伯氏菌噬菌体及其应用和制剂

说明书

本申请提供了一种变栖克雷伯氏菌噬菌体pKV‑BS375‑3.1及其应用和制剂，变栖克雷伯氏菌噬菌体pKV‑BS375‑3.1的分类学命名为Klebsiella phage，噬菌体保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏编号为：GDMCCNo:62637‑B1。本申请的噬菌体可应用于制备防治多重耐药克雷伯氏菌的药物，且潜伏期短(小于10min)，能快速杀死培养基中的宿主菌，且毒副作用小，安全性高，温度、酸碱耐受范围比较广且具有良好的亲水性，易制成喷洒剂和注射剂，对变栖克雷伯氏菌的增殖有良好的抑制、杀灭作用，对感染多重耐药变栖克雷伯氏菌的动物有很好的治疗和保护作用。

技术领域

本发明涉及微生物领域，更具体地，涉及变栖克雷伯氏菌噬菌体及其应用和制剂。

背景技术

变栖克雷伯氏菌( Klebsiella variicola)是一种机会致病革兰氏阴性杆菌，属于肠杆菌科( Enterobacteriaceae)，克雷伯氏菌属( Klebsiella)，能够以人类和动物为宿主定殖，可引起人类血液感染、呼吸道感染和尿路感染等疾病，并且研究表明变栖克雷伯氏菌引起的血液感染比由肺炎克雷伯氏菌引起的死亡率更高。变栖克雷伯氏菌作为一种新兴的人类病原体，源自于肺炎克雷伯菌复合体，该复合体包括肺炎克雷伯氏菌、准肺炎克雷伯氏菌和变栖克雷伯氏菌，其所有成员都具有重叠的生化和表型特征，但受限于检测条件，变栖克雷伯氏菌的临床感染及其实际流行率严重低估，实际上，大约20％的被认为是肺炎克雷伯氏菌的人类分离株是变栖克雷伯氏菌或准肺炎克雷伯菌。

近年来，产超广谱β-内酰胺酶和碳青霉烯酶的变栖克雷伯氏菌分离株的报道逐渐增加。2018年，在中国上海一家教学医院儿科重症监护室，从一名2岁女病人的导尿管中发现了 K.variicola SHET-01株。该菌株表现出高黏液表型(HMV)，表明它极有可能具有高毒性。药敏试验结果显示该菌株对碳青霉烯类抗生素美罗培南、亚胺培南和厄他培南表现出耐药性，MIC分别为32、32和16μg/mL；有研究报导自中国患者的血液中分离得到一株高毒力表型和多粘菌素抗性的变栖克雷伯氏菌菌株，其质粒携带的基因是高毒力表型相关的rmpA和rmpA2因子以及三个铁载体系统，即aerobactin、salmochelin和yersiniabactin。另外，中国贵州某医院也有患者在短时间内死于变栖克雷伯氏菌感染的病例报告。变栖克雷伯氏菌引起的感染令临床管理变得复杂，因此，积极研发针对多耐药、高毒力变栖克雷伯氏菌的治疗策略显得尤为重要。

噬菌体(Bacteriophage,Phage)能够高效、特异和专一的针对细菌、真菌和放线菌等宿主微生物感染并造成其裂解死亡，作为一种高生物安全性的天然杀菌物，噬菌体在人类医学、动物医学和环境科学等方面具备极大的应用潜力。随着细菌抗生素耐药性的广泛传播，抗生素治疗收效甚微，利用噬菌体遏制耐药细菌传播显示出十分广阔的应用前景，例如，Ran Nir-Paz对一例由创伤引起的左胫骨感染患者进行了噬菌体和抗生素治疗，该感染由广泛耐药鲍曼不动杆菌和多重耐药肺炎克雷伯菌引起，经过治疗，患者避免截肢并接受康复治疗；一名62岁糖尿病患者发生人工膝关节感染，临床逐渐恶化，并对抗生素严重过敏，因肺炎克雷伯菌复合物引起的持续性右假肢膝关节感染而接受截肢手术，而噬菌体治疗使得局部感染症状和体征得以缓解、相关功能得到恢复，且患者未出现与治疗相关的不良反应。

发明内容

本申请提供了一株变栖克雷伯氏菌噬菌体及其对多耐药变栖克雷伯氏菌抑制、杀灭的应用，旨为变栖克雷伯氏菌的感染提供新的治疗方案，以及对变栖克雷伯氏菌造成的环境和饲料等污染提供潜在的新型消毒手段。