[发明专利]应用LFD-RPA技术检测菠萝泛菌的引物、探针、试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种应用LFD‑RPA技术检测菠萝泛菌的引物、探针、试剂盒及其应用，属于生物技术领域。所述的引物基于菠萝泛菌的一个假定蛋白Hypothetical protein基因序列设计；所述的引物的上游引物Pa‑F序列如SEQ ID No:1所示，所述的引物的下游引物Pa‑R序列如SEQ ID No:2所示，所述的探针Pa‑Probe序列如SEQ ID No:3所示。利用待测样品的研磨液进行LFD‑RPA检测，根据LFD试纸条的条带确定待测样品是否含有菠萝泛菌。该技术摆脱了传统分子检测对专业仪器和专业技术人员的依赖，实现对菠萝泛菌的快速检测。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及到一种应用重组酶聚合酶扩增侧流层技术(LFD-RPA)快速检测菠萝泛菌的引物、探针、试剂盒及其应用。

背景技术

菠萝泛菌（ Pantoea ananatis）是一类重要的植物病原细菌，可导致植物产生枯萎、腐烂、叶斑、顶梢枯死等症状。菠萝泛菌可引起水稻、洋葱、甜樱桃、甜瓜、茶树、菠萝、甘蔗等众多大宗作物和经济作物的细菌性病害，并造成严重危害。

传统的细菌性病害的检测速度较慢，且需要PCR仪等高精尖仪器设备，主要适用于实验室内检测，无法满足快速检测的需求，使其应用受到限制。重组酶聚合酶等温扩增技术（recombinase plolymerase amplification，RPA）是一项利用重组酶聚合酶等温扩增的技术，该技术不仅可以摆脱对高值仪器的需求，且反应时间短，通过与荧光基团标记，RPA技术可与侧流层析试纸条(lateral flow dipsticks，LFD)相结合，实现扩增产物的可视化检测，不需复杂仪器设备，适合现场快速检测，可以实现病原物高特异性、高灵敏度的可视化快速检测，具有极为广泛的应用前景。目前尚未有关于应用LFD-RPA技术检测菠萝泛菌的报道。

发明内容

要解决的问题

本发明所要解决的技术问题是如何方便、快速、灵敏地检测菠萝泛菌，摆脱传统分子检测对专业仪器和专业技术人员的依赖，实现对菠萝泛菌的快速检测，弥补现有技术的不足。

技术方案

为解决上述问题，本发明采用如下的技术方案。

一种应用LFD-RPA技术检测菠萝泛菌的引物和探针，所述的引物基于菠萝泛菌的一个假定蛋白Hypothetical protein基因序列设计；

所述的引物的上游引物Pa-F序列如SEQ ID No:1所示，

所述的引物的下游引物Pa-R序列如SEQ ID No:2所示，

所述的探针Pa-Probe序列如SEQ ID No:3所示。

上述所述的应用LFD-RPA技术检测菠萝泛菌的引物和探针，所述的引物的下游引物Pa-R的5’端用生物素标记。

上述所述的应用LFD-RPA技术检测菠萝泛菌的引物和探针，所述的探针Pa-Probe的5’端用FITC基团标记，其5’端起第33位与第34位碱基中标记THF，其3’端用PHO基团标记。

一种含有上述所述的引物和探针的试剂盒。

如上述所述的试剂盒，所述的试剂盒还包括LFD试纸条。

所述的引物和探针在菠萝泛菌检测中的应用。

所述的引物和探针在制备用于检测菠萝泛菌的产品中的应用。

所述的试剂盒在菠萝泛菌检测中的应用。

上述所述的试剂盒在菠萝泛菌检测中的应用，其应用的方法，包括以下步骤：

利用待测样品的研磨液进行LFD-RPA检测；根据LFD试纸条的条带确定待测样品是否含有菠萝泛菌。