[发明专利]一种外周血来源的神经嵴源细胞的分离获取方法

说明书

本发明公开了一种外周血来源的神经嵴源细胞的分离获取方法。本发明从外周血分离单个核细胞直接培养，可以最大限度利用有分化潜能的神经嵴干细胞吧，避免造成神经嵴干细胞的损失。本发明方法分离的样本来源于外周血，具有创伤小，成本低的特点，最重要的是相比较于从组织中提取神经嵴源细胞，外周血来源提取的细胞可以作为一类生物标记物运用在临床上。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种外周血来源的神经嵴源细胞的分离获取方法。

背景技术

神经嵴源细胞是一种由胚胎外胚层细胞在发育过程中产生的暂时性的细胞群，能产生多种类型的细胞。该细胞群起源于神经管边缘的外胚层，经过上皮间充质(epithelial-to-mesenchymal transition，EMT)转换后，可广泛迁移到身体的不同部位从而形成了大量不同的组织和器官(Alkobtawi M,Ray H,Barriga E H,etal.Characterization of Pax3 and Sox10 transgenic Xenopus laevis embryos astools to study neural crest development[J].Developmental biology,2018,444:S202-S208.)。神经嵴源细胞迁移至目标组织后会以神经嵴干细胞的状态维持其多能性，而组织中的神经嵴干细胞则又进一步促进神经嵴源衍生物的生成。已从成体哺乳动物的肠道、心脏、眼角膜、骨髓等均有发现神经嵴源细胞，并且成功把神经嵴源细胞从组织中提取出来原代培养用于神经嵴源细胞方面的实验研究。

神经嵴源细胞不仅具有干细胞特征，而且也参与组织修复过程。有研究结果表明，在不同的神经嵴源衍生的成体组织应对损伤或者应激时通过神经嵴细胞衍生的特化细胞去分化或者激活残留在组织中具有神经嵴干细胞特征的细胞应对。神经嵴源细胞也可以通过旁分泌的信号方式来修复组织(Parfejevs V,Antunes AT,Sommer L.Injury andstress responses of adult neural crest-derived cells.Dev Biol.2018；444Suppl1:S356-S365.doi:10.1016/j.ydbio.2018.05.011)。

mT/mG；Wnt1-Cre小鼠是由Wnt1-Cre转基因小鼠与mT/mG双荧光报告小鼠杂交得来。Wnt1-Cre转基因小鼠系被广泛用于研究神经嵴及其衍生物，mT/mG双荧光报告小鼠在Cre发生重组前，其细胞膜表面被标记为tdTomato蛋白，因而发红色荧光；当与Wnt1-Cre转基因小鼠杂交时，在Wnt1基因调控下，Cre重组酶会剪掉位于tdTomato序列旁边的两个Loxp位点，因而与EGFP序列连接，进而表达EGFP蛋白，故而细胞膜此时发绿光。所以，在mT/mG；Wnt1-Cre小鼠体内，神经嵴来源细胞均会被标记为EGFP蛋白发绿光(Muzumdar MD,TasicB,Miyamichi K,Li L,Luo L.A global double-fluorescent Cre reportermouse.Genesis.2007；45(9):593-605.doi:10.1002/dvg.20335)。

发明内容

针对现有技术中存在的神经嵴源细胞获取较为麻烦，且创伤大等问题，本发明提供一种外周血来源的神经嵴源细胞的分离获取方法。

一种外周血来源的神经嵴源细胞的分离获取方法，从待分离对象的外周血中分离获取。

优选的，待分离对象为实验动物。

更优选的，实验动物为实验用的小鼠、大鼠或猴。

更优选的，所述神经嵴源细胞的分离获取方法，包括以下步骤：

(1)取外周血，用外周血单个核细胞分离液分离获得白膜层细胞；

(2)加入红细胞裂解液裂解红细胞；

(3)离心收集细胞即为所述神经嵴源细胞。